Efeitos da ativina a e da folistatina sobre a apoptose de células estromais do endométrio humano
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Helen Lima Del Puerto
Paula Peixoto Campos Lopes
Jose Maria Soares Junior
Paula Peixoto Campos Lopes
Jose Maria Soares Junior
Resumo
A ativina A é um fator de crescimento que estimula a decidualização, apresentando expressão relevante em desordens proliferativas do endométrio. A existência de uma ação direta da ativina A na sobrevivência de células endometriais, entretanto, ainda é desconhecida. O presente estudo investigou, em células estromais do endométrio humano (HESC), os efeitos da ativina A, e de seu antagonista folistatina, sobre: as taxas de morte celular total e apoptose; a liberação do fator de necrose tumoral (TNF); e a expressão dos genes relacionados à apoptose (Bcl-2, Bax, caspase-3 e caspase-8). Foi realizado um estudo in vitro, prospectivo e controlado, utilizando culturas primárias de HESC, obtidas de mulheres em idade reprodutiva (n=11). As células foram tratadas com meio de cultura apenas (controle), ou ativina A isoladamente (25 ng/ml) ou ativina A (25 ng/ml) e folistatina (250 ng/ml). A frequência de células efetivamente mortas e em processo de apoptose foi aferida por citometria de fluxo. As concentrações de TNF nos meios de cultura foram quantificadas por ELISA. A expressão dos genes reguladores da apoptose foi analisada por PCR em tempo real. A ativina A reduziu a porcentagem de células mortas/apoptóticas de 31% para 22% (p<0,05, teste t pareado) e diminuiu os níveis de TNF nos meios de cultura em 14%, embora não tenha sido detectada uma correlação linear entre a liberação do TNF e as taxas de apoptose. Ambos os efeitos produzidos pela ativina A foram revertidos pela folistatina. Não houve diferença estatisticamente significativa da expressão dos genes reguladores da apoptose entre os grupos de tratamento. Esses resultados sugerem que a ativina A é capaz de promover a sobrevivência das HESC. Não obstante os mecanismos regulatórios envolvidos neste processo ainda não estejam claros, é provável que o efeito da ativina A deva estar relacionado a uma via independente do TNF. Os presentes achados suportam o papel crucial da ativina A sobre processos fisiológicos e patológicos relacionados ao crescimento e diferenciação das células estromais do endométrio humano.
Abstract
Activin A is a growth factor that stimulates decidualization and is abundantly expressed in endometrial proliferative disorders. Nevertheless, whether it directly affects endometrial cell survival is still unknown. This study investigated the effects of activin A, and its antagonist follistatin, on total death and apoptosis rates and on tumor necrosis factor (TNF) release by human endometrial stromal cells (HESC). We also evaluated the effect of activin A, with and without follistatin, on expression of apoptosis-related genes (Bcl-2, Bax, caspase-3 and caspase-8) in HESC. We performed a controlled prospective in vitro study using primary HESC cultures obtained from healthy reproductive age women (n=11). Cells were treated with medium alone (control) or activin A (25 ng/mL) or activin A (25ng/mL) and follistatin (250ng/mL). Apoptosis and total cell death were measured by flow cytometry, while TNF concentrations in culture media were quantified by ELISA. The expression of apoptosis regulatory genes was assessed by real time PCR. Activin A decreased the percentage of apoptotic/dead cells from 31% to 22% (p<0.05, paired t test) and reduced TNF levels in culture medium by 14%, but there was no linear correlation between TNF release and apoptotic rates. Both effects of activin A were reversed by follistatin. The expression of apoptosis regulatory genes was not significantly different among the groups. These findings indicate that activin A promotes HESC survival, possibly by a TNF-independent pathway. This mechanism may be critical to the actions of activin A upon stromal cell growth and differentiation in physiology and disease.
Assunto
Endometriose, Fatores de necrose tumoral, Ativinas/metabolismo, Células estromais, Endometriose/metabolismo, Morte celular, Apoptose, Folistatina/genética
Palavras-chave
Ativina A, Endométrio, Folistatina, Apoptose