Amblyomma sculptum salivary protease inhibitors as potential anti-tick vaccines

Abstract

Amblyomma sculptum é o principal carrapato associado a mordidas humanas no Brasil e o principal vetor da Rickettsia rickettsii, agente causador da forma mais grave da doença brasileira febre maculosa. Moléculas produzidas nas glândulas salivares estão diretamente relacionadas à alimentação sucesso e competência vetorial. No presente estudo, identificamos sequências de A. sculptum proteínas salivares que podem estar envolvidas na hematofagia e selecionou três proteínas que passaram por caracterização funcional e avaliação como antígenos vacinais. Entre as três proteínas selecionadas, uma continha tripsina pancreática bovina Kunitz_ domínio inibidor (denominado AsKunitz) e os outros dois pertenciam ao domínio 8,9 kDa e básico famílias de cauda de proteínas salivares de carrapatos (denominadas As8.9kDa e AsBasicTail). Expressão do O RNA mensageiro (mRNA) que codifica todas as três proteínas foi detectado nas larvas, ninfas, e fêmeas em níveis basais em carrapatos não alimentados e os níveis de expressão aumentaram após o início de alimentação. As proteínas recombinantes rAs8.9kDa e rAsBasicTail inibiram a ação enzimática atividade do fator Xa, trombina e tripsina, enquanto rAsKunitz inibiu apenas a trombina atividade. Todas as três proteínas recombinantes inibiram a hemólise tanto da proteína clássica quanto da caminhos alternativos; esta é a primeira descrição de membros tick do Kunitz e 8,9kDa famílias sendo inibidoras da via clássica do complemento. Imunização de ratos com proteínas recombinantes causaram eficácia contra fêmeas de A. sculptum de 59,4% com Imunização rAsBasicTail para mais de 85% por imunização com rAsKunitz e rAs8,9kDa. A mortalidade de ninfas alimentadas com camundongos imunizados atingiu 70–100%. Portanto, todas as três proteínas são antígenos potenciais com possibilidade de se tornarem um nova ferramenta no controle de A. sculptum.