A expressão do gene de resposta precoce ao crescimento (EGR-1) após infecção pelo vírus Vaccinia.
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Resumo
Com a finalidade de maximizar os recursos para a sua replicação, muitos vírus durante os momentos iniciais da infecção podem redirecionar o metabolismo celular através da interação de proteínas virais com proteínas celulares induzindo células quiescentes a entrarem em proliferação. Assim, processos como estimulação mitogêmica celular, inibição da apoptose e indução de diferenciação
celulares são estratégias comumente utilizadas por diversos vírus. O Vírus Vaccínia (VV) é o protótipo de família poxviridae, seu genoma é constituído de DNA dupla fita linear, potencialmente capaz de codificar aproximadamente 200 polipeptídeos. Para melhor compreensão dos eventos que ocorrem precocemente durante a infecção pelo VV, nós analisamos o papel do gene de resposta precoce ao crescimento (EGR-1). A expressão de EGR-1 em resposta a infecção pelo VV foi observada após 1 hora de infecção viral e permanece elevada até 9 horas pós infecção. Também analisamos a participação do VGF (fator de crescimento do VV), na expressão do gene EGR-1, e observamos que a expressão deste gene foi independente da presença de VGF. A expressão do gene EGR-1 foi dependente da multiplicidade de infecção, sendo evidente com a menor m.o.i. 0,01 e máxima nas multiplicidades 0,1 e 1,0.
Uma vez que a expressão de EGR-1, foi totalmente anulada quando as células foram infectadas com o VV previamente inativado com U.V. e que o inibidor de síntese proteica, cicloheximida, foi capaz de inibir a expressão de EGR-1 de maneira dose dependente, podemos sugerir que para a indução de EGR-1 pelo VV é necessário síntese de proteínas virais e/ou celulares. Foram investigados também o efeito de diferentes inibidores de proteínaquinases, na indução da expressão do gene EGR-1 pelo VV. Os resultados
demonstram que o inibidor H7, foi capaz de inibir de maneira dose dependente a expressão de EGR-1 em resposta à infecção pelo VV. O inibidor de MEK PD 98059, foi capaz de inibir significantemente a expressão de EGR-1 pelo VV, o mesmo não foi observado quando utilizamos os inibidores H89, AG-126, isto é, inibidores de PKA e ERK 1 e 2 respectivamente. Entretanto o inibidor de PKC
(Ro 318220) aparentemente elevou o acúmulo de EGR-1. A regulação da expressão do gene EGR-1 é exercida através de diferentes
elementos regulatórios existentes na porção 5' dentre eles dois AP-1, quatro sítios SP-1, dois elementos de resposta ao cAMP (CRE) e 6 CarG boxes ou SRE. Desta forma, verificamos a participação de alguns destes elementos regulatórios através da análise das interações DNA/Proteína (EMSA), utilizando-se oligonucleotídeos referentes às sequências AP-1 e SRE do gene em resposta a infecção pelo VV e este estudo evidenciou a formação de complexos DNA/proteína tanto com a sequência de AP-1 quanto de SRE. A infecção com o VV induz a atividade de ligação proteica ao elemento SRE 120 minutos após a infecção, aumentando gradativamente até 270 minutos pós infecção. No entanto, a ligação proteica à sequência AP-1 foi observada somente após 3-4 horas de infecção.
Os ativadores transcricionais que se ligam à AP-1 e SRE foram também analisados utilizando-se anticorpos policlonais e verificamos a participação da proteína FOS no complexo formado no sítio AP-1 e da proteína SRF no complexo formado no sítio SRE. A eventual relevância desses resultados na replicação do VV será discutida.
Abstract
Assunto
Microbiologia, Vírus Vaccinia, Genes Precoces
Palavras-chave
Microbiologia
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