Avaliação da expressão dos receptores Toll-like 1/2 e de mediadores da imunidade inata e adaptativa em pacientes com hanseníase
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Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Evaluation of Toll-like receptor 1/2 expression and innate and adaptive immune mediators in patients with leprosy
Primeiro orientador
Membros da banca
Ana Thereza Chaves Lages
Bruno Mendes Roatt
Bruno Mendes Roatt
Resumo
Introdução: A hanseníase, uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, continua sendo um desafio para a saúde pública devido à sua complexa patogênese e às variadas respostas imunológicas que determinam suas formas clínicas. Objetivos: Este estudo teve como objetivo investigar o papel dos marcadores intracelulares e de superfície em leucócitos, com ênfase nos Toll-like receptors (TLRs), na modulação da resposta imune e na polarização das formas clínicas da doença. Métodos: Utilizando amostras de sangue periférico de pacientes recentemente diagnosticados com hanseníase, categorizados em formas paucibacilares (PB) e multibacilares (MB), investigamos a expressão e a funcionalidade desses marcadores após a estimulação in vitro com antígeno solúvel de M. leprae. Os grupos experimentais incluíram pacientes com formas PB (n=17), MB (n=15) e controles saudáveis (n=31). Foram realizadas análises detalhadas por citometria de fluxo, avaliando marcadores de superfície em macrófagos derivados de monócitos (CD14, HLA-DR, TLR1, TLR2) e linfócitos (CD3, CD4, CD45RO), além da expressão de marcadores intracelulares em macrófagos derivados de monócitos (NF-κB, IL-1β, IL-12) e linfócitos (IFN-γ, IL-10). Resultados: Observou-se que pacientes MB apresentaram índice baciloscópico significativamente maior (25,2 vezes; p < 0,0001) que PB. Nos macrófagos CD14+HLA-DR+TLR1+TLR2+NF-κB+, o grupo PB mostrou maior porcentagem de células produtoras de IL-12 (1,6x vs. controles, p=0,0046; 2,3x vs. MB, p=0,0046) e IL-1β (1,6x vs. controles, p=0,0147; 1,9x vs. MB, p=0,0192), com padrão similar na IMF. Quanto aos linfócitos T CD4+CD45RO+, o grupo PB apresentou maior produção de IFN-γ (2,6x vs. MB, p=0,0012), enquanto os MB exibiram maior IL-10 (2,2x vs. PB, p=0,0054). A razão IFN-γ/IL-10 foi marcadamente maior nos PB tanto em porcentagem celular (28,5x, p<0,05) quanto em IMF (5,14x, p<0,05). Conclusão: Nossos resultados demonstram diferenças imunológicas significativas entre as formas PB e MB, com padrão TH1 predominante nos PB versus resposta regulatória nos MB, destacando o papel crítico dos TLRs e citocinas na polarização da hanseníase.
Abstract
Introduction: Leprosy, a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, remains a public health challenge due to its complex pathogenesis and the wide range of immune responses that determine its clinical forms. Objectives: This study aimed to investigate the role of intracellular and surface markers on leukocytes – particularly Toll-like receptors (TLRs) – in modulating the immune response and influencing clinical polarization of the disease. Methods: Peripheral blood samples were collected from newly diagnosed leprosy patients classified into paucibacillary (PB) and multibacillary (MB) forms. The expression and function of immune markers were evaluated after in vitro stimulation with soluble M. leprae antigen. Study groups included PB patients (n=17), MB patients (n=15), and healthy controls (n=31). Flow cytometry was used to assess surface markers on monocyte-derived macrophages (CD14, HLA-DR, TLR1, TLR2) and lymphocytes (CD3, CD4, CD45RO), as well as intracellular markers in macrophages (NF-κB, IL-1β, IL-12) and lymphocytes (IFN-γ, IL-10). Results: MB patients showed a significantly higher bacilloscopic index (25.2-fold increase; p < 0.0001) compared to PB patients. In CD14⁺HLA-DR⁺TLR1⁺TLR2⁺NF-κB⁺ macrophages, the PB group had higher percentages of IL-12-producing cells (1.6-fold increase compared to controls, p = 0.0046; 2.3-fold increase compared to MB, p = 0.0046) and IL-1β-producing cells (1.6-fold increase compared to controls, p = 0.0147; 1.9-fold increase compared to MB, p = 0.0192), with similar findings for IMF. In CD4⁺CD45RO⁺ T lymphocytes, the PB group showed higher IFN-γ production (2.6 times higher than MB, p = 0.0012), whereas IL-10 was higher in the MB group (2.2 times higher than PB, p = 0.0054). The IFN-γ/IL-10 ratio was substantially higher in PB patients, both in cell percentages (28.5-fold increase, p < 0.05) and IMF (5.14-fold increase, p < 0.05). Conclusion: Our findings demonstrate significant immunological differences between PB and MB forms, with a predominant TH1 response in PB and a regulatory profile in MB, underscoring the critical role of TLRs and cytokines in leprosy polarization.
Assunto
Hanseníase, Mycobacterium leprae, Receptores Toll-Like, Imunidade, Citocinas, Dissertação Acadêmica
Palavras-chave
Hanseníase, Mycobacterium leprae, Toll-like receptors, Resposta imune inata, Citocinas inflamatórias