Desenvolvimento de vacinas inativadas contra a Língua Azul e a Doença Epizoótica Hemorrágica para cervídeos: ensaios pré-clínicos.
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Elaine Maria Seles Dorneles
Francisco Carlos Faria Lobato
Francisco Carlos Faria Lobato
Resumo
A língua azul e a doença epizoótica hemorrágica são viroses caracterizadas pela ocorrência de
distúrbios hemorrágicos em cervídeos e são responsáveis por impactos negativos na conservação
dessas espécies. Essas doenças apresentam como agentes etiológicos os vírus BTV e EHDV,
respectivamente. A vacinação é o método mais eficaz de controle e prevenção dessas viroses,
entretanto, no Brasil, vacinas contra o BTV e o EHDV não são licenciadas pelos órgãos
competentes e não há vacinas disponíveis para cervídeos no mercado nacional e exterior. Em
razão do exposto, o principal objetivo dessa pesquisa foi o desenvolvimento de vacinas e a
realização de ensaios pré-clínicos com formulações vacinais contendo amostras de BTV-3, BTV-
14, BTV-18, BTV-19, BTV-22, BTV-24, EHDV-1 e EHDV-2 isoladas na reserva biológica da
Itaipu Binacional. As suspensões virais obtidas em laboratório foram inativadas pela beta-
propriolactona, adjuvadas de 10% de hidróxido de alumínio e 40% de saponina e distribuídas em
duas vacinas distintas: vacina 1 (sorotipos BTV-3, BTV-14, BTV-18 e BTV-19) e vacina 2
(sorotipos BTV-22, BTV-24, EHDV-1 e EHDV-2). Em seguida, testes de inativação viral,
esterilidade, inocuidade e potência foram realizados. O teste de inativação viral confirmou a
inativação completa dos vírus, enquanto o teste de esterilidade demonstrou a ausência de
crescimento bacteriano. O teste de inocuidade, realizado em quatro coelhos, não evidenciou
nenhum efeito adverso à vacinação. Para a realização do teste de potência, foram utilizados 15
coelhos distribuídos equitativamente em três grupos experimentais. Os animais foram vacinados
isoladamente (G1 – Vacina 1; G2 – Vacina 2) e associadamente (G3 – Vacinas 1+2) com três
doses, administradas aos 0, 21 e 51 dias de experimentação. As mensurações de anticorpos totais
e anticorpos neutralizantes do teste de potência foram realizadas, respectivamente, por meio de
imunodifusão em gel de ágar (IDGA), utilizando as amostras coletadas aos 81 dias de
experimentação, e soroneutralização em microplaca, utilizando as amostras coletadas aos 0, 21,
51 e 81 dias de experimentação. Os resultados do IDGA indicaram a presença de anticorpos totais
em 100% dos animais testados para BTV, demonstrando que os antígenos foram capazes de
induzir resposta imune humoral. Não foram realizados testes de IDGA para o EHDV. Já no teste
de soroneutralização, as medianas obtidas indicaram ausência de anticorpos neutralizantes para o
EHDV e presença de anticorpos neutralizantes para o vírus BTV-18 (na vacinação isolada), e
BTV-18, BTV-19 e BTV-24 (na vacinação associada) nas amostras coletadas no 81º dia de
experimentação. Foi possível observar que as formulações desenvolvidas não foram capazes de
induzir resposta de anticorpos neutralizantes para todos os sorotipos e que a vacinação associada
promoveu melhor resposta imune humoral. Nossos resultados permitirão o desenvolvimento de
novas pesquisas para a formulação de vacinas para cervídeos brasileiros.
Abstract
Bluetongue and epizootic hemorrhagic are viruses’ diseases characterized by the occurrence of
hemorrhagic disorders in deer and are responsible for negative impacts on these species’
conservation. These diseases have BTV and EHDV viruses, respectively, as their etiologic agents.
Vaccination is the most effective method of controlling and preventing these viruses. However,
in Brazil, vaccines against BTV and EHDV are not licensed by regulatory organizations and there
are no vaccines available for deer in national or foreign markets. In view of the above, the main
objective of this research was the development of vaccines and the performance of pre-clinical
trials with vaccine formulations containing samples of BTV-3, BTV-14, BTV-18, BTV-19, BTV-
22, BTV -24, EHDV-1 and EHDV-2 isolated in the biological reserve of Itaipu Binacional. The
viral suspensions obtained in the laboratory were inactivated by beta-propiolactone, adjuvanted
with 10% aluminum hydroxide and 40% saponin and distributed in two different vaccines:
vaccine 1 (serotypes BTV-3, BTV-14, BTV-18 and BTV -19) and vaccine 2 (serotypes BTV-22,
BTV-24, EHDV-1 and EHDV-2). Then, viral inactivation, sterility, inoculation, and potency tests
were performed. The viral inactivation test confirmed complete virus inactivation, while the
sterility test demonstrated the absence of bacterial growth. The inoculation test, carried out on
four rabbits, did not show any adverse effects to vaccination. To perform the potency test, 15
rabbits were equally distributed in three experimental groups. The animals were vaccinated
separately (G1 - Vaccine 1; G2 - Vaccine 2) and in combination (G3 - Vaccines 1 + 2) with three
doses, administered at 0, 21 and 51 days of experimentation. The measurements of total antibodies
and neutralizing antibodies of the potency test were carried out, respectively, by means of agar
gel immunodiffusion (AGID), using the samples collected after 81 days of experimentation, and
soroneutralization in microplate, using the samples collected at 0, 21, 51 and 81 days of
experimentation. The results of the AGID indicated the presence of total antibodies in 100% of
the animals tested for BTV, demonstrating that the antigens were able to induce humoral immune
response. No AGID tests were performed for EHDV. In the soroneutralization test, the medians
obtained indicated the absence of neutralizing antibodies for EHDV and the presence of
neutralizing antibodies for BTV-18 virus (in the isolated vaccination), and BTV-18, BTV-19 and
BTV-24 viruses (in the associated vaccination) in samples collected on the 81st day of
experimentation. It was possible to observe that the formulations developed were not able to
induce neutralizing antibody response for all serotypes and that the associated vaccination
promoted a better humoral immune response. Our results will allow the development of new
research for the formulation of vaccines for Brazilian deer.
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Palavras-chave
Cervídeo, Vírus da língua azul-, – Doenças transmissíveis em animais –
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