Validação de antissoro para uso em imuno-histoquímica para detecção de Trypanosoma cruzi
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Alfredo Jose Afonso Barbosa
Maria da Consolacao Vieira Moreira
Maria da Consolacao Vieira Moreira
Resumo
Introdução: O diagnóstico de infecção pelo T. cruzi é essencial em muitas situações, sobretudo nos casos de reinfecção, como acontece em indivíduos transplantados cardíacos. Seu diagnóstico pode ser confirmado pelo encontro de ninhos do T. cruzi em amostras diversas, como a biópsia endomiocárdica (BEM) para avaliar rejeição ao enxerto. Como são escassos, tais ninhos nem sempre são identificados rotineiramente. Para aumentar a sensibilidade desse diagnóstico, a imuno-histoquímica (IHQ) pode ser promissora. Objetivo: Validar antissoro (anticorpo policlonal) para detectar, pela IHQ, infecção peloT. cruzi. Métodos: Foram empregados: 1) controles positivos (CP): 13 BEM, 12 biópsias de pele e 1 coração com ninhos de T. cruzi em cortes corados pela hematoxilina-eosina (HE); 2) controles negativos (CN): a) 10 corações explantados e 10 BEM sem ninhos de amastigotas nem sinais clínicos ou laboratoriais de infecção chagásica; b) 5 biópsias de pele e 1 biópsia de intestino com leishmaniose; 3) Casos: 31 BEM de pacientes chagásicos sem ninhos do parasito à HE e sabidamente positivos por PCR para DNA do T. cruzi. Como anticorpo primário na IHQ, usou-se soro hiperimune de coelhos infectos pelo T. cruzi. Resultados: Houve marcação IHQ em 21 dos 26 CP (80,8%) e em 1 caso de leishmaniose cutânea. Os valores de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo foram, respectivamente, 80,8%, 96,2%, 95,5% e 83,3%. Em 4 das 31 amostras selecionadas como casos (12,9%) foram identificados ninhos de formas amastigotas de T. cruzi pela reação imuno-histoquímica, não reconhecidos ao exame histológico convencional. Conclusões: Os resultados do estudo mostram que IHQ com o antissoro testado aumenta a sensibilidade do diagnóstico e recomendam seu emprego rotineiro na avaliação de BEM de transplantados cardíacos com doença de Chagas.
Abstract
Introduction: The diagnosis of T.cruzi infection is essential in many situations, especially in cases of reinfection in individuals with cardiac transplants. Its diagnosis can be confirmed by finding T. cruzi nests in different samples, such as the endomyocardial biopsy (EMB) to evaluate graft rejection. Because they are scarce, such nests are not always identified routinely. To increase the sensitivity of this diagnosis, immunohistochemistry (IHC) may be promising. Objective: To test an antiserum for detecting T. cruzi in histological sections by IHC. Methods: We used: 1) positive controls (PC): 13 EMB, 12 skin biopsies and 1 heart withT. cruzi nests in sections stained with hematoxylin-eosin (HE); 2) negative controls: a) 10 explanted hearts and 10 EMB without amastigotes nests nor clinical or laboratory signs of chagasic infection; b) 5 skin biopsies and 1 intestinal biopsy with leishmaniasis; 3) Cases:31 EMB of chagasic patients without parasite nests in HE sections and positive by PCR for T. cruzi DNA. As a primary antibody in IHC, hyperimmune serum from T.cruzi-infected rabbits was used. Results: IHC was positive in 21 of the 26 PC (80,8%) and in 1 case of cutaneous leishmaniasis. Sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value were, respectively, 80.8%, 96.2%, 95.5% and 83.3%. In 4 of the 31 cases (12.9%), IHC revealed T. cruzi nests not recognized by conventional histological examination. Conclusions:The results of the study show that IHC using the tested antiserum increases the sensitivity of the diagnosis and recommend its routine use in the evaluation of EMB of cardiac transplanted patients with Chagas' disease.
Assunto
Infecção, Anticorpos, Medicina, Trypanosoma cruzi, Imuno-Histoquímica
Palavras-chave
Patologia