Avaliação da atividade antimicrobiana in vitro do peptídeo paje em isolados clínicos de acinetobacter baumannii resistentes aos carbapenêmicos.
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
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Magna Cristina de Paiva
Rodrigo Dias
Rodrigo Dias
Resumo
A resistência antimicrobiana é uma ameaça a saúde pública global. Acinetobacter baumannii é um importante agente causador de infecções relacionadas à assistência à saúde. Com a escassez de novos antimicrobianos, peptídeos como o PAJE, desenvolvido pela fusão de Papiliocina e Jelleína-1, surgem como alternativa promissora contra a resistência antimicrobiana. Este estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana de PAJE em isolados clínicos de A.baumannii resistentes ao carbapenêmicos (CRAB). Ensaios microbiológicos com PAJE foram realizados e concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de 4 µg/mL foram observadas. O peptídeo promoveu lise das células bacterianas sendo evidenciado no comprimento de onda de 260nm. O tratamento do inóculo bacteriano de A. baumannii por um período de 1 hora com metade do valor da CIM (½ CIM) foi capaz de reduzir a CIM da amicacina em 32 vezes. O PAJE reduziu os biofilmes de formação, limitando-o ao crescimento em 11%, e em biofilmes pré-estabelecidos, o PAJE reduziu o biofilme de 24h em aproximadamente 77%. No ensaio de sinergismo, o PAJE apresentou efeito aditivo com os antimicrobianos convencionais. O peptídeo mostrou-se estável em diferentes condições de pH, em concentrações variadas de soro humano, soro fetal bovino, albumina sérica e na presença de NaCl. Apenas na presença de tripsina, foi observado aumento da CIM. O PAJE apresentou efeito bactericida contra células de A. baumannii em crescimento logarítmico eliminando por completa a carga bacteriana após 30 minutos de exposição ao peptídeo nas concentrações de 5X e 10X da CIM. No ensaio de resistência, contrariando o que é descrito na literatura, aumentou significativamente o valor de CIM. O PAJE apresentou um perfil hemolítico adequado e toxicidade insignificantes frente a células das linhagens VERO e HaCat apresentando grande potencial para ser explorado no estudo e no desenvolvimento de um novo agente antimicrobiano eficaz contra isolados de A. baumannii.
Abstract
Antimicrobial resistance is a threat to global public health. Acinetobacter baumannii is an important agent of healthcare-associated infections. Considering the lack of new antimicrobials, peptides such as PAJE, developed by the combination of Papiliocin and Jellein-I, have emerged as a promising alternative against antimicrobial resistance. This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of PAJE in clinical isolates of carbapenem-resistant A.baumannii (CRAB). Microbiological assays with PAJE were performed and MIC and MBC of 4 µg/mL were observed. The peptide promoted lysis of the bacterial cells, evident at a wavelength of 260nm. Treating the bacterial inoculum of A. baumannii for a period of 1 hour with half the MIC value (½ MIC) was able to reduce the MIC of amikacin by 32 times. In forming biofilms, PAJE reduced formation, limiting growth by 11%. In pre-established biofilms, PAJE reduced the 24-hour biofilm by approximately 77%. In the synergism test, PAJE showed an additive effect with conventional antimicrobials. The peptide was stable in different pH conditions, at different concentrations of human serum, fetal bovine serum, serum albumin and in the presence of NaCl. Only in the presence of trypsin MIC was increased. PAJE showed a bactericidal effect against logarithmically growing A. baumannii cells, completely eliminating the bacterial load after 30 minutes' exposure to the peptide at concentrations of 5X and 10X the MIC. In the resistance test, opposite to what is described in the literature, the MIC value increased significantly. PAJE showed an adequate haemolytic profile and negligible toxicity against VERO and HaCat cells lines, presenting great potential to be explored in the study and development of a new antimicrobial agent effective against A. baumannii isolates.
Assunto
Palavras-chave
Acinetobacter baumannii, Peptídeo antimicrobiano, Paje, Resistência antimicrobiana