Isolamento e seleção de fungos filamentosos produtores de lipases.
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Autor(es)
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Jacques Robert Nicoli
Everson Alves Miranda
José Geraldo Sabioni
Leonides Rezende Júnior
Everson Alves Miranda
José Geraldo Sabioni
Leonides Rezende Júnior
Resumo
Os estudos sobre a produção de substâncias de origem microbiana são realizados a partir de cepas adquiridas de coleções de cultura ou cepas isoladas de nichos naturais. No presente estudo foi avaliada a capacidade de produção de lipase por 73 cepas fúngicas, 14 obtidas de coleções de cultura e 59 isoladas de amostras do solo do cerrado de Minas Gerais, com o emprego de técnicas de enriquecimento seletivo. O isolamento e seleção primária foram realizados em meio de cultura contendo ágar, emulsão de óleo de oliva, sais biliares e nutrientes. As colônias lipolíticas foram detectadas pela presença no meio opaco de uma zona clara ao redor delas. Vinte e uma cepas foram avaliadas como produtoras em potencial e a capacidade de produção determinada em condições de cultivo submerso e cultivo em estado sólido (seleção secundária). Apenas 7 delas foram selecionadas como boas produtoras. A cepa melhor produtora, identificada como Colletotrichum gloesporioides, produziu 27.700 U/L de lipase, empregando-se inóculo vegetativo, com cultivo submerso em frascos agitados a 150 rpm e 30 oC, durante 96 h, em meio de cultura basal contendo peptona bacteriológica (20,0 g/L), óleo de oliva (8,0 mL/L) e sais inorgânicos, no pH 7,0. A preparação bruta da enzima foi capaz de hidrolisar amplo espectro de substratos incluindo gordura de porco (banha), óleos vegetais e tributirina. Foram realizados estudos visando a determinação das melhores condições para a produção da lipase pelo C. gloesporioides. Inicialmente foram identificados os fatores (variáveis) mais importantes, tendo sido, em seguida, selecionados como significativos a peptona bacteriológica, o óleo de oliva e o pH inicial do meio de cultura. Os estudos para a determinação das condições otimizadas para a produção da lipase foram realizados aplicando-se a metodologia de superfícies de respostas, com o emprego de um planejamento fatorial 23 com cinco pontos centrais. Foi demonstrado que o modelo estatístico linear que indicou a variação da produção da enzima em função da concentração da peptona (na faixa de 10 a 30 g/L), do óleo de oliva (na faixa de 4-16 mL/L) e do pH (na faixa de 6-7) foi representado pela equação ajustada ~ = 27,2 3,4 x1 4,1 x2 + 0,7 x3 1,8 x1 x2 + 0,6 x1 x3 + 0,7 x2 x3 2,1 x1 x2 x3, sendo simplificada para ~ = 27,2 3,4 x1 4,1 x2, devido ao efeito do pH e das possíveis interações entre os efeitos não serem significativos. Desse modo, foi verificado que a representação bidimensional da superfície de resposta do referido modelo foi um plano inclinado obliquamente em relação aos eixos cartesianos com direção descendente indo da direita para a esquerda. Concluiu-se que, para serem conseguidos maiores rendimentos de produção, devia-se deslocar a região experimental para menores valores de x1 (peptona) e de x2 (óleo de oliva). Seguindo essa orientação conseguiu-se que a cepa fúngica produzisse cerca de 36.000 U/L de lipase extracelular que se mostrou bastante ativa em pH alcalino.
Abstract
Assunto
Fungos Identificação, Biotecnologia, Lipase
Palavras-chave
fungos lipolíticos, seleção, Colletotrichum gloesporioides, lipase, produção