Desenvolvimento e validação de método por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas sequencial para análise de resíduos de anabolizantes em urina de bovinos
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Ana Maria de Resende Machado
Zenilda de Lourdes Cardeal
Zenilda de Lourdes Cardeal
Resumo
Neste trabalho foi realizada a otimização e validação de um método de identificação e quantificação de resíduos de anabolizantes em urina de bovinos por meio da análise por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas sequencial. A otimização da etapa de hidrólise enzimática indicou que a melhor condição foi a de 37,5°C por 16 horas, utilizando a enzina -glucuronidase/sulfatase de Helix pomatia, em pH 5,2. O procedimento de extração e purificação otimizado consistiu em: extração líquido-líquido com éter dietílico e extração em fase sólida com cartuchos a base de HLB e de aminopropilsilano. A derivatização com MSTFA/NH4I/etanotiol foi otimizada por meio do planejamento fatorial Box-Behnken 33, avaliando os fatores: tempo, potência do micro-ondas e volume do derivatizante. A condição ótima consistiu em reação por 2 minutos, com 25 L de derivatizante e potência de 900 W. Outro procedimento de derivatização foi realizado para os analitos 17-trembolona e 17-trembolona, utilizando MSTFA/I2 seguido de MSTFA puro. O método foi validado para 20 analitos, através da avaliação dos parâmetros de linearidade, seletividade, precisão, veracidade, limite de decisão, capacidade de detecção, limite de detecção, limite de quantificação e incerteza de medição. As curvas analíticas, para todos os analitos, tiveram adequação ao ajuste linear. O método foi seletivo para os analitos em estudo, frente aos interferentes avermectinas. A veracidade do método foi considerada adequada (90,5-132,4%) para os analitos pesquisados, com exceção de -estradiol, zeranol, -zearalenol e noretandrolona. A repetibilidade (2,9-43,0%) e a precisão intermediária (3,6-36,4%) foram consideradas adequadas para todos os analitos. Os valores de limite de decisão (0,03-0,99 g kg-1), capacidade de detecção (0,05-1,68 g kg-1) e incerteza de medição (0,130-1,487 g kg-1), foram considerados adequados para todos os analitos. Nos valores de limite de quantificação o método apresentou precisão satisfatória (5,6-49,5%) para todos os analitos, e a recuperação (58,8-138,8%) também foi considerada adequada, exceto para zearalenona, -zearalenol, -zearalenol, -trembolona e -trembolona. Foram realizadas análises de amostras reais de urina de bovinos e os resultados obtidos corroboraram com os resultados obtidos por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial.
Abstract
This work involved the optimization and validation of a method of identification and quantification of anabolic residues in bovine urine by gas chromatography tandem mass spectrometry.The enzymatic hydrolysis optimization indicated the best condition at 37.5°C for 16 hours, using a -glucuronidase sulfatase enzyme of Helix pomatia at pH 5.2. The extraction and purification optimization consisted of liquid-liquid extraction with diethyl ether and solid phase extraction with HLB and aminopropylsilane cartridges. A derivatization with MSTFA/NH4I/ethanethiol was optimized through the 33 Box-Behnken factorial desing, evaluating the factors: time, microwave power and volume of derivatization reagent. The optimal condition consisted of reaction for 2 minutes with 25 L of derivatizing and power of 900 W. Another derivatization procedure was performed for 17-trenbolone and 17-trenbolone, using MSTFA/I2 followed by pure MSTFA. The validation parameters evaluated were: linearity range, selectivity, precision, veracity, decision limit, detection capability, limit of detection, limit of quantification, and uncertainty. The analytical curves, for all the analytes, were adjusted to the linear fit. The method was selective for the analytes under study, against the interfering avermectins. The accuracy of the method was considered adequate (90.5-132.4%) for the analyzed analytes, with the exception of -estradiol, zeranol, -zearalenol and norethandrolone. Repeatability (2.9-43.0%) and intermediate precision (3.6-36.4%) were considered adequate for all analytes. The decision limit values (0.03-0.99 g kg-1), detection capacity (0.05-1.68 g kg-1) and measurement uncertainty (0.130-1.487 g kg-1) were considered adequate for all analytes. In the limit of quantification values the method presented satisfactory accuracy (5.6-49.5%) for all analytes, and recovery (58.8-138.8%) was also considered adequate, except for zearalenone, -zearalenol, -zearalenol, -trenbolone and -trenbolone. Analyzes of real bovine urine samples were performed and the results obtained corroborated with the results obtained by liquid chromatography tandem mass spectrometry.
Assunto
Urina Análise, Química analítica, Esteroides anabolicos, Cromatografia de gás, Derivatização, Espectrometria de massa
Palavras-chave
espectrometria de massas, cromatografia gasosa, urina de bovinos, Anabolizantes, derivatização