Produção e caracterização funcional de novas isoformas de fosfolipase D recombinantes da aranha Loxosceles similis
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Marília Martins Melo
Maria Raquel Santos Carvalho
Clara Guerra Duarte
Luciana Maria Silva
Maria Raquel Santos Carvalho
Clara Guerra Duarte
Luciana Maria Silva
Resumo
O loxoscelismo é um problema de saúde pública no Brasil, mas o veneno da aranha Loxosceles similis (Moenkhaus, 1898), que é uma espécie de importância médica e apresenta grande capacidade de se adaptar ao ambiente urbano, ainda é pouco caracterizado. Loxtox é uma família de enzimas fosfolipase D (PLD) que são o principal componente do veneno de Loxosceles e são responsáveis pelos efeitos clínicos do loxoscelismo. As toxinas Loxtox correspondem a 15% dos transcritos das glândulas de veneno de L. similis (Moenkhaus, 1898), no entanto, a família Loxtox de L. similis (Moenkhaus, 1898) ainda não foi totalmente caracterizada. Assim, este projeto teve como objetivo a caracterização funcional de Loxtox recombinantes e a análise da capacidade imunogênica das toxinas para a obtenção de anticorpos capazes de neutralizar os efeitos provocados pelo veneno de L. similis (Moenkhaus, 1898). Dessa forma, foram clonadas e caracterizadas duas toxinas Loxtox recombinantes, a recLoxtox s1A e a recLoxtox s11A. Ambas as toxinas recombinantes mostraram atividade in vitro dependendo do pH e a recLoxtox s1A causou efeitos mais intensos na pele de coelhos nos testes in vivo do que a rcLoxtox s11A. Ambas as toxinas recombinantes foram usadas em protocolos de imunização e epítopos mapeados nas toxinas recombinantes mostraram reações imunogênicas diferentes para os soros produzidos. Ainda, os anticopos policlonais gerados contra a recLoxtox s1A apresentou maior potencial para reduzir significativamente os efeitos in vitro e in vivo do veneno de L. similis (Moenkhaus, 1898). Assim, foram obtidas e caracterizadas duas novas isoformas de Loxtox do veneno de L.similis, as quais podem ser valiosas ferramentas biotecnológicas e imunológicas contra o loxoscelismo.
Abstract
Loxoscelism is a recognized public health problem in Brazil, but the venom
from Loxosceles similis (Moenkhaus, 1898) spider, which is widespread in Brazil due
to its adaptability to the urban environment, remains poorly characterized. Loxtox is a
family of phospholipase D enzymes (PLDs), which are the major components of
Loxosceles venom and are responsible for the clinical effects of loxoscelism. Loxtox
toxins correspond to 15% of L. similis (Moenkhaus, 1898) venom gland transcripts,
but the Loxtox family of L. similis (Moenkhaus, 1898) has yet to be fully described. In
this study, we aimed the functional charactereization of recombinant Loxtox and to
analyze their immunological properties in order to obtain antibodies able to neutralize
the effects evocked by L. similis (Moenkhaus, 1898) venom. Thus, we cloned and
functionally characterized recLoxtox s1A and recLoxtox s11A. These recombinant
toxins exhibited different in vitro activities depending on pH, and recLoxtox s1A had
more intense effects on rabbit skin than did recLoxtox s11A in vivo. Both recombinant
toxins were used in immunization protocols, and mapping of their epitopes revealed
different immunological reactions for the produced immune serums. Additionally,
polyclonal antibodies raised against recLoxtox s1A had greater capacity to
significantly reduce the in vitro and in vivo effects of L. similis (Moenkhaus, 1898)
venom. In summary, we obtained and characterized two novel Loxtox isoforms from
L. similis (Moenkhaus, 1898) venom, which may be valuable biotechnological and
immunological tools against loxoscelism.
Assunto
Genética, Aranhas, Venenos de aranha, Fosfolpases, Soro, Antivenenos
Palavras-chave
Loxtox, Fosfolipases D, Loxosceles similis (Moenkhaus, 1898), Loxoscelismo, Toxina recombinante, Soro