Avaliação da concentração inibitória mínima pelo método Resazurin Microtiter Assay-Rema frente aos fármacos antituberculose de primeira e segunda linha e testes Fenotípicos e Genotípicos
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tese de doutorado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Ênio Roberto Pietra Pedroso
Afrânio Lineu Kritski
Jordana Graziella Alves Coelho dos Reis
Isabela Neves de Almeida
Cristiane Meneses de Pádua
Afrânio Lineu Kritski
Jordana Graziella Alves Coelho dos Reis
Isabela Neves de Almeida
Cristiane Meneses de Pádua
Resumo
RESUMO I
O diagnóstico rápido de Mycobacterium tuberculosis resistente aos fármacos é um desafio em países de baixa renda. Os métodos indicadores de oxi-redução colorimétricos como Resazurin Microtitre Assay (REMA) são relativamente novos e indicados pela Organização Mundial da Saúde como testes para determinar a sensibilidade aos fármacos antituberculose.
O ojetivo do estudo foi comparar o resultado da Concentração Inibitória Mínima (MIC) do Mycobacterium tuberculosis por REMA com MGIT-960 kit SIRE (BD BACTECTM MGITTM 960 System), GenoType®MTBDRplus e GeneXpert®MTB/RIF.
Foram incluídos 27 isolados clínicos de M. tuberculosis (14 sensíveis e 13 resistentes) pelo método MGIT-960 kit SIRE. O MIC foi realizado pelo método REMA (MIC-REMA), e os testes genotípicos por GenoType®MTBDRplus e GeneXpert®MTB/RIF. Para a análise de comparação entre os métodos foi utilizado o teste exato de Fisher’s. A concordância entre os resultados do MIC-REMA com o MGIT-960 kit SIRE e o GenoType®MTBDRplus para rifampicina (RIF) e para isoniazida (INH) com kappa < 0,001. A mesma concordância foi encontrada entre MIC-REMA de RIF com GeneXpert®MTB/RIF com kappa < 0,001.
Esses resultados mostram que o MIC-REMA foram altamente concordantes com os testes fenotípicos e genotípicos para RIF e INH.
RESUMO II
Em muitos países os testes diagnósticos para a tuberculose (TB) ainda é realizada por métodos convencionais como a baciloscopia e cultura em meio Löwenstein-Jensen (LJ) e o teste de sensibilidade (TS) pelo método da proporção indireto (MP) que requer 6 a 8 semanas para produzir resultados. Estima-se que um número expressivo de casos de TB-DR não são diagnosticados prontamente e ficam sem tratamento eficaz.
Para o controle global da TB-DR, os laboratórios de micobacteriologia devem fortalecer a capacidade de realizar o TS de primeira e segunda linha por meio de métodos rápidos. A Organização Mundial da Saúde (OMS) recomendou o uso de métodos para tornar mais efetivo o controle da TB e principalmente da TB-DR que tem um aumento significativo de casos anualmente. Dentre eles, encontra-se o Nitrate Reductase Assay (NRA), que tem mostrado excelentes resultados, rapidez, aplicabilidade e baixos custos.
Este estudo teve como objetivo avaliar o TS aos fármacos de primeira linha direto de amostras clínicas respiratórias pelo método NRA (NRA-D) utilizando o kit SIRE Nitratase®PNB para estimar o desempenho do método comparando com o MGIT 960 kit SIRE, método utilizado como referência.
Métodos: As amostras respiratórias com baciloscopia positiva foram coletadas em dois hospitais de Belo Horizonte, Minas Gerais (MG), Brasil, um de referência em TB e outro de alto complexidade. As amostras foram processadas nos respectivos laboratórios e após testadas quanto à sensibilidade a rifampicina (RIF), isoniazida (INH), estreptomicina (S) e etambutol (E) por NRA-D no laboratório de Micobactérias da Faculdade de Medicina e pelo MGIT 960 no laboratório de referência do estado de MG.
Resultados: A concordância entre os métodos foi avaliada pelo parâmetro k, que teve como resultados: 0,96, 0,92, 0,88 e 0,66 para rifampicina (RIF), isoniazida (INH), estreptomicina (S) e etambutol (E), respectivamente. A sensibilidade e especificidade foram de 99,3% e 100% para RIF, 98,6% e 95,2% para INH, 98,7% e 100% para S e 99,4% e 100% para E, respectivamente, mostrando excelente acurácia quando comparado com o MGIT 960 kit SIRE.
Com relação ao tempo de leitura, 33,3% das amostras foram reveladas após 14 dias, 38,8% após 21dias ( total acumulado de 72% em 21 dias) e 27,8% após 28 dias, que são semelhantes aos dos métodos automatizados.
Conclusão: os resultados de acúracia e concordância e a rapidez da obtenção dos resultados, mostram que esse método pode ser utilizado em substituição aos métodos mais demorados em países onde não há recursos para o uso de técnicas moleculares e automatizadas.
Abstract
Assunto
Mycobacterium tuberculosis, Testes de Sensibilidade Microbiana, Tuberculose Resistente a Múltiplos Medicamentos, Estreptomicina, Isoniazida, Rifampina, Etambutol, Tuberculose
Palavras-chave
M. tuberculosis, resazurin assay, MIC: concentração inibitória mínima, tuberculose multidroga resistente, SIRE Nitratase
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