Trifolium pratense: Friable calli, cell culture protocol and isoflavones content in wild plants, in vitro and cell cultures analyzed by UPLC

Abstract

Trifolium pratense L., Fabaceae, é uma fonte rica em isoflavonas e se tornou o foco de vários estudos relacionados à sua atividade fitoestrogênica. O objetivo deste estudo foi estabelecer o protocolo de germinação e cultura celular para T. pratense e quantificar o conteúdo de isoflavonas em culturas celulares, cultivadas in vitro e plantas selvagens colhidas em duas estações diferentes. O meio Murashige Skoog suplementado com ácido naftaleno acético e cinetina foi capaz de produzir a maior formação de calos friáveis. As culturas de calos foram analisadas qualitativamente após 60 dias de cultura, e as plantas in vitro após 30, 45 e 60 dias de cultivo. A análise química foi realizada por cromatografia líquida de ultra eficiência, usando as curvas de linearidade da daidzeína, genisteína, formononetina e biochanina A como padrões. As concentrações de isoflavonas detectadas em plantas selvagens foram diferentes nos dois períodos de colheita e contrastaram em conteúdo quando comparadas às plantas in vitro. As culturas de células exibiram perfis e concentrações diversos de isoflavonas, nenhuma das quais apresentou o isoflavonoide biochanina A. A pectinase foi usada para promover redução de aglomerados e acabou alterando as características de produção de metabólitos secundários em algumas culturas. A formononetina apresentou maior concentração em amostras de trevo vermelho selvagem (15,407 mg g−1), e nas plantas cultivadas in vitro a maior concentração foi da daidzeína (17,591 mg g−1) aos 60 dias. Os métodos utilizados para esta pesquisa foram eficazes, e as plantas de trevo vermelho da variedade analisada podem ser cultivadas in vitro visando a produtividade comercial por apresentarem teores maiores ou iguais às plantas selvagens nos períodos estudados, mesmo sem o uso de elicitores durante o cultivo