Estudo da influência das células T reguladoras autólogas e alogênicas numa Reação Mista de Linfócitos (MLR)
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Study of the influence of autologous and allogenic regulatory T cells in a Mixed Lymphocyte Reaction (MLR)
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Resumo
O transplante de órgãos é uma estratégia clínica para tratar pacientes com falência funcional de órgãos, mas o grande obstáculo no sucesso do transplante clínico é a rejeição de células. O insucesso resulta ativação das respostas aloimunes mediadas por células T, através do reconhecimento de aloantígenos apresentados por células apresentadoras de antígenos (APCs) do doador ou do receptor. A rejeição aguda pode ser evitada através de estratégias profiláticas usando terapia imunossupressora, mas estes imunossupressores são incapazes de evitar a rejeição crônica. Um tratamento para rejeição crônica tem sido o retransplante, mas a escassez de órgão tem induzido pesquisas de novas terapias para promover tolerância operacional nos receptores. As células T reguladoras (Tregs) são potentes imune supressos das respostas imunes através de produção de citocinas supressoras, supressão direta de células efetoras e modulação da maturação e função das células apresentadoras de antígenos. Células Treg estão envolvidas com a indução e manutenção da tolerância e tem sido alvo importante de estudo para terapia associada a indução de tolerância operacional. Uma terapia celular usando células T reguladora CD4+ CD25hi CD127low FoxP3+ como estratégia de indução de tolerância operacional tem sido alvo de estudos em vários modelos de transplantes. Uma abordagem detalhada da função das células T reguladoras neste contexto, permitirá atingir um entendimento amplo dos mecanismos moleculares na promoção de tolerância operacional e permitir o sucesso terapêutico. Neste trabalho, estudamos o comportamento imunorregulatório das células Tregs em um ensaio in vitro chamado Mixed Lymphocyte Reaction (MLR), onde os linfócitos T respondedores de um indivíduo quando cultivados juntamente com as APCs estimuladoras de outro indivíduo para induzir reatividade alogênica na presença ou não de células Treg homotípica ou alotípica às APCs durante 7 dias. As células Treg, células T CD4+ e APCs foram separadas por sorting e depois plaqueadas. As células T CD4+ foram marcadas com CFSE e o grau de proliferação foi analisado de acordo com a diluição do CFSE. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que as células T reguladoras são capazes de imunossuprimir a proliferação de células T CD4+ e que ainda as células T CD4+FoxP3+ alogênicas são melhores indutoras de supressão da proliferação em MLR. Observou-se também que as células Tregs suprimiram a produção de IFNγ e TNF em MLR, mas não induziu secreção de IL-10. Esses achados mostram que as células Tregs são potentes indutora da supressão da ativação de células TCD4+ por células APCs, sendo promissoras para desenvolvimento de uma terapia celular.
Abstract
Organ transplantation is a clinical strategy to treat patients with functional organ failure, but the
major obstacle to the success of clinical transplantation is the rejection of cells. The
unsuccessful results of activation alloimmune responses mediated by the T cells, through
recognition of alloantigens presented by donor or recipient antigen presenting cells (APCs).
Acute rejection can be prevented by prophylactic strategies using immunosuppressive therapy,
but these immunosuppressants are unable to prevent chronic rejection. A treatment for chronic
rejection has been retransplantation, but organ shortage has also driven research for new
therapies to promote operational tolerance in recipients. T regulator cells (Tregs) are potent
immune suppressors of immune responses by suppressor cytokines production, direct
suppression of effector cells and modulation of maturation and function of antigen presenting
cells. Treg cells are involved in the induction and maintenance of tolerance and have been an
important study target for therapy associated with induction of operational tolerance. A cellular
therapy using CD4+ CD25hi CD127low FoxP3+ regulatory T cells as a strategy of operational
tolerance induction has been the subject of studies in various transplants model. A detailed
approach to the role of regulatory T cells in this context, achieved a broad understanding of the
molecular mechanisms in promoting operational tolerance and enabling therapeutic success. In
this paper, we studied the immunoregulatory behavior of Treg cells in an in vitro assay called
Mixed Lymphocyte Reaction (MLR) where T lymphocytes of an individual responders when
cultured together with the APCs that stimulate another individual to induce allogeneic reactivity
in the presence or absence of homotypic or allopidic Treg cells to the APCs for 7 days. Treg
cells, CD4+ T cells and APCs were separated by sorting and then plated. CD4+ T cells were
marked with CFSE and the proliferation degree was analyzed according to CFSE dilution. The
results obtained in this study showed that regulatory T cells are capable of immunosuppressing
the proliferation of CD4+ T cells and that allogeneic FoxP3+ CD4+ T cells are good suppression
of proliferation inducing in MLR. It was also observed that Treg cells suppressed IFN-γ and
TNF-α production in MLR, but did not induce IL-10 secretion. These findings show that Tregs
cells are prominent suppression inducers of the activation of CD4+ T cells by APCs, being
promising for the development of a cellular therapy.
Assunto
Bioquímica e imunologia, Terapia Baseada em Transplante de Células e Tecidos
Palavras-chave
Transplante, Aloreconhecimento,, Terapia Celular, Tolerância, Célula Treg,, Reação Mista de Linfócitos