Purificação e caracterização de uma nova metaloprotease da serpente Bothrops moojeni Hoge, 1966(Squamata: Viperidae) com ação na agregação plaquetária
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Leonilda Stanziola
Júnia de Oliveira Costa
Marcelo Emílio Beletti
Júnia de Oliveira Costa
Marcelo Emílio Beletti
Resumo
As peconhas de serpentes contem uma mistura complexa de diferentes proteinas e peptideos biologicamente ativos. O presente estudo teve como objetivo avaliar as atividades proteoliticas e biologicas, assim como o efeito inibitorio sobre a agregacao plaquetaria de uma nova metaloprotease da peconha de Bothrops moojeni. A purificacao da enzima, denominada BmooMPa-II, foi realizada atraves de duas etapas cromatograficas (troca ionica em DEAE-Sephacel e exclusao molecular em Sephacryl S300). BmooMPa-II e uma proteina monomerica que apresenta uma massa molecular aparente de 25kDa em SDS-PAGE 14% em condicoes redutoras. A atividade fibrinogenolitica foi avaliada por SDS-PAGE 14%. Primeiramente, a BmooMPa-II clivou a cadeia Aa do fibrinogenio seguida pela cadeia Bb, mas nao apresentou efeitos sobre a cadeia y. A atividade fibrinogenolitica foi inibida pelo b-mercaptoetanol, EDTA e 1,10-fenantrolina. A faixa de temperatura e pH otimos para a atividade fibrinogenolitica foram de 30-50 C e pH=8, respectivamente. Os resultados indicam que essa proteina e provavelmente uma a-fibrinogenase e pertence a classe PI das SVMPs. A BmooMPa-II nao apresentou atividades hemorragica, coagulante ou anticoagulante. Alem disso, a BmooMPa-II nao induziu edema ou hiperalgesia significantes. As observacoes histologicas mostraram que a BmooMPa-II causou alteracoes morfologicas no figado, rins, pulmoes e musculo de camundongos Swiss. A enzima BmooMPa-II inibiu a agregacao plaquetaria induzida por ADP, colageno, ristocetina e epinefrina. Quando desnaturada por altas temperaturas, a BmooMPa-II apresentou acao mais rapida de inibicao da agregacao plaquetaria induzida por ADP. Por fim, nossos resultados sugerem o uso da BmooMPa-II como um potente inibidor da agregacao plaquetaria.
Abstract
Snake venoms contain a complex mixture of many different biologically active proteins and peptides. The present study aimed to evaluate the proteolytic and biological activities, as well as inhibitory effects on platelet aggregation by a new metalloproteinase from Bothrops moojeni venom. The purification of enzyme, named BmooMPa-II, was carried out through two chromatographic steps (ion-exchange on DEAE-Sepharose and molecular exclusion on Sephacryl S300). BmooMPa-II is a monomeric protein with an apparent molecular mass of 25kDa by SDS-PAGE 14% under reducing conditions. Fibrinogenolytic activity was evaluated by SDS-PAGE 14%. First, BmooMPa-II cleaves the aa-chain of fibrinogen followed by the Bb-chain, and shows no effects on the y-chain. Fibrinogenolytic activity is inhibited by b-mercaptoethanol, EDTA and 1,10-phenantroline. Its optimum temperature and pH for the fibrinogenolytic activity were 30-50 C and pH=8, respectively. Results indicate that this protein probably is a a-fibrinogease and belongs to class PI of SVMPs. BmooMPa-II was devoid of hemorrhagic, coagulant or anticoagulant activities. Furthermore, BmooMPa-II induced no significant edema or hyperalgesia. Histological observations showed that BmooMPa-II caused morphological alterations in liver, lung, kidney and muscle of Swiss mice. BmooMPa-II inhibited platelet aggregation induced by ADP, collagen, ristocetin and epinephrine. When denatured by high temperatures, BmooMPa-II was faster in inhibition of platelet aggregation induced by ADP. Finally, our results suggest the use of BmooMPa-II as a potent inhibitor of platelet aggregation.
Assunto
Animais peçonhentos Toxicologia, Bothrops, Agregação, Jararaca (Cobra) Veneno, Bioinformática, Metaloproteinases, Plaquetas (Sangue)
Palavras-chave
¿-fibrinogenase e agregacao plaquetaria, Metaloprotease, Peçonha de Bothrops moojeni