Estudo da fisiologia da glândula salivar e do intestino de larvas de terceiro estádio e adultos de Chrysomya megacephala (Fabricius, 1794)
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tese de doutorado
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Resumo
A mosca Chrysomya megacephala (Fabricius, 1794) tem estreita relação com humanos e animais, sendo importante por causar miíases e atuar como disseminador de patógenos. Suas larvas são necrobiontófagas e os adultos alimentam-se de suspensões nutritivas e bactérias. O pH e as atividades biológicas presentes no intestino e aspectos relacionados com as glândulas salivares são fatores que interferem diretamente no processo digestivo e consequentemente, no desenvolvimento e sobrevivência de indivíduos. Dessa maneira, o objetivo desta pesquisa foi estudar a fisiologia da glândula salivar e do intestino de larvas de terceiro estádio e adultos de C. megachephala. A massa das larvas foi mensurada diariamente em balança analítica. Para a avaliar o fluxo intestinal, as larvas foram alimentadas com carne de peixe macerada e homogeneizada com carvão vegetal ativado em pó. A quantidade de proteínas por par de glândula salivar das larvas foi avaliada pelo método de dosagem de proteínas descrito por Bradford (1974). O pH intestinal foi estimado por corantes indicadores de pH. A atividade das endoproteases no intestino foi analisada pela hidrolise do substrato azoalbumina. A atividade da catalase no intestino foi determinada pela taxa de decomposição do peróxido de hidrogênio, na presença de extrato de intestino, e a atividade da lisozima foi mesurada pela lise da bactéria Micrococcus lysodeikticus. Os resultados mostraram que o ganho de massa foi extremamente rápido nos três primeiros dias de desenvolvimento larval e em quatro dias as larvas passaram de 0,3 mg para 42,5 mg. As larvas de terceiro estádio com três dias de vida apresentaram maior comprimento das glândulas salivares e maior quantidade de proteínas. O tempo médio que o alimento ingerido pelas larvas levou para ser excretado foi de 48,8 ± 6,2 minutos. Nas larvas, a região do intestino médio médio (IMM) apresentou o pH mais ácido (entre 4,0 e 6,5) quando comparado com intestino médio anterior (IMA), intestino médio posterior (IMP) e intestino posterior (IP) que apresentaram pH variando de 4,5 a 7,0. Nos adultos, o pH no interior de todas as regiões avaliadas do intestino foi levemente ácido (entre 5,5 e 6,5). A atividade das endoproteases do intestino foi maior nas larvas nos pHs 7,5 e 8,0 e nos adultos, independentemente do pH testado, a atividade foi mais baixa. Larvas e adultos possuem atividade de lisozima no intestino, entretanto, essa atividade foi duas vezes maior em larvas. As larvas apresentaram atividade média de catalase no intestino maior que nos adultos que apresentaram atividade média aproximadamente 22 vezes menor. As partes do intestino das larvas com maior atividade de catalase foi o IMM. Entretanto, nos adultos o IMM e IMP foram as regiões com maiores atividades de catalase. Todas as regiões do intestino das larvas apresentaram atividade de catalase superior em relação àquelas verificadas para os adultos.
Futuros estudos devem elucidar o papel da glândula salivar e o intestino das L3 de C. megacephala para entendermos como ocorre a digestão de proteínas, de lipídeos, carboidratos quais bactérias colonizam o intestino e o papel dos produtos de secreção e excreção na digestão.
Abstract
The Chrysomya megacephala fly (Fabricius, 1794) has a close relationship with humans
and animals, for acting as an important potential disseminator of pathogens and for causing
myiasis. Its larvae are necrobiontophagous and the adults feed on nutrient suspensions and
bacteria, with the gut being the place for processing the diet. The pH and biological activities
present in the intestine are factors that interfere directly in the digestive process and, consequently,
in the development and survival of individuals. Thus, the aim of this study was to study the
physiology of the salivary gland and intestine of third instar larvae and adults of C. megachephala.
The specimen mass was measured daily on an analytical balance. To assess the intestinal flow,
the larvae were fed with macerated fish meat homogenized with powdered activated charcoal. The
amount of proteins per salivary gland pair of third instar larvae was evaluated by the protein
dosage method described by Bradford (1974). To assess the intestinal pH, different pH indicator
dyes were used. The activity of endoproteinase in the intestine was evaluated by decomposition
of the substrate azoalbumin. The catalase activity in the intestine was measured by the rate of
decomposition of hydrogen peroxide in the presence of the intestine extract and the lysozyme
activity was measured by the lysis of the bacterium Micrococcus lysodeikticus. The results showed
that the mass gain was extremely fast in the first three days of larval development and in four days
the larvae increased from 0.3 mg to 42.5 mg. Three-day-old third-instar larvae presented the length
of the salivary glands with differences in length (p<0.01) and in the amount of proteins (p<0.001).
The mean time that the food ingested by the larvae took to be excreted was 48.8 ± 6.2 minutes. In
larvae, the middle midgut region had the most acidic pH (between 4.0 and 6.5) when compared to
the other regions that had pH ranging from 4.5 to 7.0. In adults, the pH inside all evaluated regions
of the intestine was acidic (between 5.5 and 6.5). The activity of endoproteases in the intestine
was higher in larvae at pH 7.5 and 8.0 and in adults, regardless of the pH tested, the activity was
lower. Larvae and adults have lysozyme activity in the intestine, which is more than twice as high
in larvae. The larvae had an average activity of catalase in the intestine of 400 μmol/min while
the adults had an average activity approximately 22 times lower (18 μmol/min; p<0.05). The parts
of the intestine of larvae with the highest catalase activity were the IMM with 94.0 μmol/min.
While in adults were the regions of the IMM and IMP, both with 4.5 μmoles/min. All the different
regions of the intestine of the larvae presented catalase activity higher than those verified for the
adults. The results obtained in this study demonstrate the need to further study the role of the
salivary gland and the intestine of the L3 of C. megacephala to understand how the digestion of
proteins, lipids and carbohydrates occurs which bacteria colonize the intestine, the role of the
products of secretion and excretion in digestion, development and in the innate immune response.
Assunto
Parasitologia, Chrysomya Megacephala/fisiologia
Palavras-chave
mosca varejeira, tubo digestivo, saliva, pH, proteases, catalase, lisozima
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