Diagnóstico sorológico de herpesvírus bovino 1 e 5: proteínas virais, recombinantes e peptídeos sintéticos em suportes sólidos comerciais e modificados por engenharia de superficie.
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Zelia Ines Portela Lobato
Luiz Guilherme Dias Heneine
Herman Sander Mansur
Marcelo Fernandes Camargos
Luiz Guilherme Dias Heneine
Herman Sander Mansur
Marcelo Fernandes Camargos
Resumo
O Herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) e o Herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) encontram-se amplamente difundidos no Brasil e no mundo, tendo o seu controle dificultado pela grande similaridade em nível genômico e antigênico que os mesmos apresentam. Não há, até o momento, um teste de diagnóstico que diferencie sorologicamente esses dois vírus. Esse trabalho teve como objetivo padronizar sistemas indiretos de ELISA para a diferenciação sorológica desses agentes, utilizando vírus purificados, proteínas recombinantes e peptídeos sintéticos incorporados em biomateriais modificados por engenharia de superfície, em comparação com sua incorporação em suporte sólido comercial. As análises in sílico para o estudo das proteínas recombinantes e dos peptídeos sintéticos foram baseadas nas regiõescodificadoras das glicoproteínas gG e gC, respectivamente. As proteínas virais foram produzidas em células MDBK, as recombinantes foram produzidas em sistema procarioto, fusionadas a caudas de histidina e os peptídeos sintéticos foram produzidos pela síntese Fmoc.Vários biomateriais melhoraram a especificidade de reconhecimento das distintas moléculas. com valores variando de 10 a 60% acima daqueles obtidos com o suporte sólido comercial. Os materiais modificados por engenharia de superfície se mostraram uma potente epromissora ferramenta para o desenvolvimento dos testes diferenciais propostos neste trabalho.
Abstract
Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) and Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) are distributed around the world and causes great economic impact, needing hard disease control programs. These viruses share a high homology at nucleotide and aminoacide level. Due to this great similarity few serological methodologies to carry out differential diagnosis that can distinguish both viruses are available. The aim of this work was to develop indirect ELISA assays based on total virus proteins (produced in MDBK cells), glycoprotein G recombinant histidin fused produced inprokaryote system and gC-synthetic peptides produced by F-moc synthesis, for both viruses. Organic-inorganic hybrid material has been developed to improve conventional methods to immobilize biomolecules, enhancing specificity during chemical interactions. The moleculesproduced were attached to solid commercial support and biomaterials modified by engineering surface. Many hybrid materials showed great improvement with enhanced specificity varying from 10 to 60% for bovine herpesvirus serological diagnosis, showing to be a promising tool tobe used in control programs.
Assunto
Bovino Doenças, Herpesvírus em animais Diagnóstico, Nanotecnologia
Palavras-chave
BoHV-1, BoHV-5, Nanotecnologia, ELISA