Seleção de peptídeos com potencial aplicação no diagnóstico de geohelmintíases
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
Título alternativo
Selection of peptides with potential application in the diagnosis of Soil-transmitted helminth
Primeiro orientador
Membros da banca
Silvio Santana Dolabella
Stefan Michael Geiger
João Luis Reis Cunha
Stefan Michael Geiger
João Luis Reis Cunha
Resumo
As geohelmintíases estão entre as doenças tropicais de maior prevalência no mundo, afetando aproximadamente 1,5 bilhão de pessoas. Entre as espécies de importância epidemiológica, se destacam, Ascaris lumbricoides, Trichiuris trichiura, Ancylostoma duodenale, Necator americanus e Strongyloides stercoralis. Esses helmintos são facilmente transmitidos através da ingestão de ovos ou exposição às larvas, que são liberados nas fezes de indivíduos infectados. As helmintíases causam grande impacto a saúde pública, afetando o aprendizado e desenvolvimento principalmente de crianças em fase escolar e pré-escolar. Nesse contexto, o controle dessas parasitoses se torna necessário e o diagnóstico preciso assume um papel fundamental nesse processo. O diagnóstico dos geohelmintos tem se baseado em técnicas parasitológicas, moleculares e imunológicas. Entretanto, os métodos disponíveis têm se monstrado falhos e de difícil aplicação em campo, sendo necessário o aprimoramento das técnicas atuais e a busca de novos métodos diagnósticos que sejam sensíveis, específicos e que não necessitem de aparelhagem especializada. No imunodiagnóstico são utilizados anticorpos específicos ou antígenos puros e fracionados do parasito para detecção de infecções. Nos últimos anos, o uso de extrato de antígenos de patógenos em ensaios de imunodiagnóstico tem sido substituído por peptídeos ou proteínas recombinantes com maior especificidade diagnóstica. O objetivo do presente trabalho foi selecionar alvos conservados para o diagnóstico sorológico de nematódeos, assim como alvos específicos para espécies epidemiologicamente relevantes na infecção humana. A partir de ferramentas in silico foi realizada a análise do proteoma predito, com base nos genes identificados em sequenciamentos de genoma dos nematódeos de interesse. Dessas análises foram identificados 1160 peptídeos que apresentaram alto score de predição de epítopos lineares de células B, entre estes, foram selecionados alvos específicos e conservados entre as espécies de interesse e ausentes em outros helmintos. Esses peptídeos foram submetidos a testes de reatividade por immunoblotting, com soros de indivíduos sabidamente positivos para as espécies de interesses, confirmados por técnicas parasitológicas, afim de filtrar os alvos mais promissores. No total foram selecionados 107 peptídeos alvos, sendo que 80 específicos (13 para ancilostomídeos, 41 para Ascaris sp., e 26 para S. stercoralis) e 27 conservados em mais de uma espécie. Os diversos alvos identificados apresentam grande potencial para o aprimoramento do diagnóstico das geohelmintíases.
Abstract
Soil-transmitted helminths is among the most prevalent tropical diseases in the world,
affecting approximately 1.5 billion people. Among the species of epidemiological
importance, Ascaris lumbricoides, Trichiuris trichiura, Ancylostoma duodenale, Necator
americanus and Strongyloides stercoralis stand out. These helminths are easily
transmitted through ingestion of eggs or exposure to larvae, which are released into the
feces of infected individuals. Helminthiasis has a major impact on public health, affecting
the learning and development of children in school and pre-school age. In this context,
the control of these parasites becomes necessary and the accurate diagnosis of these
infections assumes a fundamental role in this process. The diagnosis of soil-transmitted
helminths has been based on parasitological, molecular and immunological techniques.
However, the available methods have proven to be flawed and difficult to apply in the
field, requiring the improvement of current techniques and the search for new diagnostic
methods that are sensitive, specific and that do not require specialized equipment. In the
immunodiagnosis specific antibodies, pure or fractionated antigens of the parasite are
used to detect infections. In recent years, the use of extract of pathogen antigens in
immunodiagnostic assays has been replaced by peptides or recombinant proteins that
have greater diagnostic specificity. The aim of the present study was to select conserved
targets for the serological diagnosis of nematodes, as well as specific targets for
epidemiologically relevant species in human infection. The predicted proteome was
analyzed using in silico tools, based on the genes identified in the genome sequences of
the nematodes of interest. From these analyzes, 1160 peptides were identified that showed
a high score prediction for linear B cell epitopes, among which specific targets were
selected and conserved among the species of interest and absent in other helminths. These
peptides were subjected to reactivity tests by immunoblotting, with sera from individuals
known to be positive for the species of interest, confirmed by parasitological techniques,
in order to filter the most promising targets. In total, 107 target peptides were selected,
80 of which were specific (13 for hookworms, 41 for Ascaris sp., and 26 for S. stercoralis)
and 27 conserved in more than one species. The various targets identified have great
potential for improving the diagnosis of soil-transmitted helminths.
Assunto
Parasitologia, Helmintías, Testes Imunológicos, Biomarcadores
Palavras-chave
Geohelmintíases, Imunodiagnóstico, Biomarcador
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