The recombinase Rad51 plays a key role in events of genetic exchange in Trypanosoma cruzi
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Universidade Federal de Minas Gerais
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A recombinase Rad51 desempenha um papel fundamental nos eventos de troca genética em Trypanosoma cruzi
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A detecção de troca genética tem sido um fator limitante para aprofundar o conhecimento sobre os mecanismos pelos quais o Trypanosoma cruzi é capaz de gerar progênie e diversidade genética. Aqui, mostramos que a incorporação de análogos de timidina halogenados, seguida de imunomarcação, é um método confiável não apenas para detectar híbridos de células fundidas de T. cruzi , mas também para quantificar sua porcentagem em populações desse parasita. Por meio dessa abordagem, conseguimos detectar e quantificar híbridos de células fundidas dos clones CL Brener e Y de T. cruzi. Dado o aumento na detecção de híbridos de células fundidas na cepa híbrida natural CL Brener, que apresenta níveis elevados de transcritos de RAD51 e BRCA2, investigamos mais a fundo o papel da Rad51 – uma recombinase envolvida na recombinação homóloga – no processo de troca genética. Verificamos também que a detecção de híbridos de células fundidas em T. cruzi superexpressando RAD51 é maior em comparação com células do tipo selvagem, sugerindo um papel fundamental para Rad51 na formação ou na estabilização de híbridos de células fundidas neste organismo.
Abstract
Detection of genetic exchange has been a limiting factor to deepen the knowledge on the mechanisms by which Trypanosoma cruzi is able to generate progeny and genetic diversity. Here we show that incorporation of halogenated thymidine analogues, followed by immunostaining, is a reliable method not only to detect T. cruzi fused-cell hybrids, but also to quantify their percentage in populations of this parasite. Through this approach, we were able to detect and quantify fused-cell hybrids of T. cruzi clones CL Brener and Y. Given the increased detection of fused-cell hybrids in naturally-occurring hybrid CL Brener strain, which displays increased levels of RAD51 and BRCA2 transcripts, we further investigated the role of Rad51 – a recombinase involved in homologous recombination – in the process of genetic exchange. We also verified that the detection of fused-cell hybrids in T. cruzi overexpressing RAD51 is increased when compared to wild-type cells, suggesting a key role for Rad51 either in the formation or in the stabilization of fused-cell hybrids in this organism.
Assunto
DNA, Trypanosoma cruzi, Genética
Palavras-chave
DNA metabolism, DNA recombination, Parasite biology
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https://www.nature.com/articles/s41598-018-31541-z
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