Avaliação de imunogenicidade de formulados vacinais recombinantes contra Clostridioides difficile
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tese de doutorado
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Resumo
A infecção por Clostridioides difficile (ICD) é de grande relevância em suínos
neonatos, dado principalmente às perdas produtivas e manifestações clínicas associadas
às lesões colônicas causadas pelos principais fatores de virulência do patógeno, as
exotoxinas A (TcdA) e B (TcdB). A necessária aplicação de métodos de controle e
prevenção de C. difficile e/ou seus fatores de virulência é potencializada pelo caráter
zoonótico do agente, sendo os casos comunitários da infecção considerados emergentes
e em ascensão. O agente, que se encontra disseminado em diversos países, incluindo o
Brasil, possui o seu controle dependente principalmente de medidas sanitárias e,
atualmente, de uma vacina baseada em toxoides A e B, cujos dados de eficácia em
granjas positivas ainda são desconhecidos. Contudo, métodos imunoprofiláticos
compostos por proteínas recombinantes, tecnologia sabidamente vantajosa para a
produção industrial, ainda não existem. Dessa forma, o presente estudo teve como
objetivo o desenvolvimento de duas vacinas recombinantes a partir de fragmentos
imunogênicos das toxinas A e B de C. difficile para a prevenção da infecção em leitões.
A seleção dos fragmentos antigênicos para elaboração das vacinas, formados pela
porção C-terminal das toxinas A e B, contou com ensaios in silico para a avaliação da
possível presença de epítopos para células B, bem como otimização dos códons para
expressão em E. coli. Dada a montagem do vetor plasmideal sintético, clonagem em E.
coli e expressão das proteínas, o estudo seguiu com a realização de testes de
esterilidade, inocuidade e potência em hamsters. Ainda, foi realizada a imunização de
coelhos em três doses e utilizando-se duas diferentes massas antigênicas de ambas as
vacinas, seguido da realização de ensaios na espécie alvo, para análise e quantificação
da produção de IgG anti-TcdA e anti-TcdB por ELISA. Foram sinterizadas duas vacinas:
bivalente (AB), composta por fragmentos recombinantes de TcdA e de TcdB; e quimera
(Q), correspondente à síntese dos mesmos fragmentos em uma única proteína. As
vacinas recombinantes sintetizadas apresentaram-se estéreis e inócuas, apesar de não
terem protegido os hamsters sírios, altamente susceptíveis à infecção, após o seu
desafio. Títulos de anticorpos anti-TcdA e TcdB foram observadas a partir da primeira
imunização dos coelhos com as vacinas AB e Q. O platô da reatividade entre os
anticorpos presentes no soro dos animais e os antígenos foi atingido com a realização de
duas doses, sendo desnecessária a aplicação de uma terceira dose (p≤0,05). Ainda, não
foi observado diferenças significativas entre as massas antigênicas presentes nas vacinas
(10 e 50 μg), tampouco foi observada diferença entre as vacinas Q e AB em coelhos
(p≥0,05). Similarmente ao observado em coelhos, a presença de anticorpos anti-TcdA e
anti-TcdB foi observada nas porcas imunizadas com a primeira dose de ambas as
vacinas AB e Q (20 μg cada). A colostragem dos leitões neonatos por porcas vacinadas
resultou em aquisição de imunidade passiva anti-TcdA e anti-TcdB pelos animais, em
contraste com os leitões controle (p≤0,05). A imunização de porcas com a vacina Q
conferiu títulos de anticorpos anti-TcdA e anti-TcdB superiores aos títulos induzidos
pela vacina AB no soro dos leitões, sugerindo a superioridade deste composto como
imunógeno contra as toxinas A e B de C. difficile. Em conclusão, o presente estudo
mostrou que as proteínas recombinantes sintetizadas foram capazes de induzir títulos de
anticorpos contra as proteínas A e B de C. difficile em matrizes suínas, sendo
passivamente transferidos aos leitões colostrados que possivelmente tornaram-se
protegidos contra a infecção por C. difficile.
Abstract
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Clostridioses, Diarreia em animais
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