Cultivo primário da glândula salivar, canal salivar e intestino médio anterior de triatomíneos (Hemiptera, Reduviidae) para o estudo de moléculas bioativas relacionadas com a hematofagia
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Alan Lane de Melo
Mauricio Roberto Viana Sant'anna
Mauricio Roberto Viana Sant'anna
Resumo
Triatomíneos são insetos hematófagos vetores do Trypanosoma rangeli e do T. cruzi. A capacidade vetorial dos triatomíneos em hospedeiro humano está diretamente relacionada à sua performance alimentar. O objetivo deste trabalho foi obter e padronizar cultivo primário de glândula salivar, canal salivar e intestino médio anterior de triatomíneos para o estudo de moléculas bioativas relacionadas com a hematofagia. As células de glândula salivar de Rhodnius prolixus permaneceram viáveis em cultura por 30 dias. Três tipos de células foram identificados nas culturas de glândula salivar ao MO: o tipo I com células alongadas e fusiformes, o tipo II globosas e com dois núcleos evidentes e o tipo III globosas e uninucleadas. As células do tipo II foram as mais abundantes independentemente da idade do cultivo. O material secretado (MS) das culturas de glândula salivar apresentou as atividades anticoagulante e apirásica e uma maior concentração de bandas na faixa de 15-25 kDa. No cultivo de canal salivar de R. prolixus foram observadas apenas células uninucleares que se apresentaram aderidas ao ducto salivar, formando uma camada única de células justapostas. A partir do terceiro dia de cultivo foram observados grânulos de secreção se formando ao redor das células do canal, indicando que as células estavam metabolicamente ativas e sugerem que o canal salivar possui outras funções além de simplesmente conduzir a saliva em direção as peças bucais do inseto. Entretanto, não foi evidenciada atividade anticoagulante e apirásica no MS do cultivo de canal salivar. Já os cultivos de intestino médio anterior de Triatoma brasiliensis e de T. infestans, ao MO, apresentaram células globosas, geralmente agrupadas. No interior destas células verificou-se a presença de vesículas, sugerindo produção de biomoléculas. No MS dos cultivos intestinais detectou-se as atividades anticoagulante e lisozímica. A adição de ecdisona nos cultivos intestinais de T. infestans alterou o perfil protéico e de atividade anticoagulante em relação ao controle (sem adição de hormônio), sugerindo uma ação inibidora sobre a produção de biomoléculas intestinais. Já a adição de serotonina aparentemente não alterou o perfil protéico e nem das atividades anticoagulante e lisozímica. Entretanto, o teste de viabilidade detectou que a maioria das células intestinais de T. brasiliensis e T. infestans encontraram-se mortas no oitavo dia de cultivo. A curta sobrevida do intestino médio anterior nas condições de cultivo utilizadas no presente trabalho provavelmente dificultou o estudo da influência hormonal sobre a atividade das células intestinais. Nossos resultados demonstraram que é possível obter cultura primária de glândula salivar, canal salivar e intestino médio anterior de triatomíneos para o estudo de biomoléculas in vitro.
Abstract
Assunto
Parasitologia, Glandula Salivar Fisiologia, Triatoma Aspectos moleculares, Inseto Intestino médio
Palavras-chave
triatomíneo, biomoléculas, cultivo primário