Estudo de interação da proteína Pb27 de Paracoccidioides brasiliensis com um ligante nucleotídico e de sua aplicação em um biossensor
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Rafael Pinto Vieira
Rafaela Salgado Ferreira
Rafaela Salgado Ferreira
Resumo
A proteína Pb27 de Paracoccidioides brasiliensis é um antígeno que tem sido estudado para a produção de vacinas e no diagnóstico da Paracoccidioidomicose (PCM), principal micose sistêmica da América Latina, cuja importância epidemiológica se deve à extensa área de endemicidade no Brasil, e ao acometimento de trabalhadores rurais em idade ativa. Recentemente, o primeiro modelo de estrutura da Pb27 foi determinado por cristalografia por difração de raios-X, e através de estudos de homologia estrutural a proteína foi classificada como uma nucleotidiltransferase de função desconhecida. Além disso, a triagem virtual de ligantes e estudos de ressonância nuclear magnética identificaram o nucleotídeo citidina trifosfato (CTP) como provável ligante da proteína. A fim de caracterizar quantitativamente a interação da Pb27 com esse nucleotídeo, foram realizados ensaios de interação por supressão de fluorescência de triptofano, fluorimetria diferencial de varredura e calorimetria de titulação isotérmica. Os resultados indicaram uma interação fraca, com constante de dissociação da ordem de 10^-3 M, exotérmica (ΔH = -34,3 KJ/mol) e exergônica (ΔG = -15,9 KJ/mol). Além disto, foram feitos estudos preliminares da utilização da proteína para a detecção de anticorpos anti-Pb27 em um biossensor impedimétrico, para futura utilização no diagnóstico da PCM. Os resultados indicaram o reconhecimento dos anticorpos pela proteína, por análise de espectroscopia de impedância eletroquímica. Porém, ainda são necessários mais estudos para a padronização dos biossensores, e futuros testes com o soro de pacientes.
Abstract
Assunto
Bioquímica, Paracoccidioidomicose, Nucleotidiltransferase, Proteínas recombinantes, Técnicas biossensoriais
Palavras-chave
Paracoccidioidomicose, Pb27, Nucleotidiltransferase, Proteína recombinante, Interação proteína-ligante, Constante de dissociação, Biossensores