Avaliação do perfil imunológico de pacientes com Hemofilia recém-diagnosticada
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Adriano de Paula Sabino
Olindo Assis Martins Filho
Olindo Assis Martins Filho
Resumo
A hemofilia congênita é uma doença hemorrágica resultante da deficiência dos fatores VIII (FVIII) na hemofilia A ou IX (FIX) na hemofilia B. Indivíduos com hemofilia necessitam de infusões frequentes de concentrados de FVIII ou FIX para profilaxia e/ou tratamento das hemorragias, entretanto, durante o tratamento, cerca de 30% e 5% dos pacientes com hemofilia A e B, respectivamente, desenvolvem anticorpos (inibidores) que inibem a atividade coagulante do fator infundido, promovendo a ineficácia da reposição de fator. A fisiopatologia relacionada ao desenvolvimento de inibidores é pouco compreendida. Estudos anteriores avaliaram o perfil imunológico de pacientes com hemofilia, mas nenhum estudo acompanhou este perfil em diferentes fases da doença. Esse projeto tem como objetivo traçar o perfil imunológico de pacientes com hemofilia recém-diagnosticada, previamente não tratados com o concentrado de fator deficiente. Para isso, 32 pacientes foram incluídos nos hemocentros de Minas Gerais, Espirito Santo, Paraná e Rio de Janeiro, dos quais 28 (87,5%) com hemofilia A e 4 pacientes (12,5%) com hemofilia B. No momento da inclusão, 22 (68,8%) não haviam recebido nenhuma dose de fator e 10 (31,2%) tiveram, no máximo, 4 dias de exposição ao fator. O perfil fenotípico leucocitário de 19 (59,4%) pacientes foi avaliado a partir de imunofenotipagem por citometria de fluxo. Além disso, foram dosadas citocinas, quimiocinas e micropartículas (MPs) de 28 (87,5%) pacientes com hemofilia A (PHA) e 47 controles, também por citometria de fluxo. Observamos que o perfil fenotípico leucocitário em pacientes com hemofilia recém-diagnosticada é heterogêneo. Os níveis de MPs de plaquetas, leucócitos totais, linfócitos T, neutrófilos, monócitos e eritrócitos nos pacientes virgens de fator (0DE) foram maiores quando comparados aos controles (p<0,05). Também observamos maiores níveis de IL-4, IL-6, IL-8 e IL-10 e menores níveis de MIG nos pacientes quando comparados aos controles (p<0,05). Os pacientes com mais de um dia de exposição (>1DE) apresentaram níveis elevados de IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF, IFN- e IL-2 com relação aos controles, além de uma redução nos níveis de MIG. Em conclusão, verificamos que o perfil imunológico modulado por citocinas e quimiocinas difere entre pacientes que nunca tiveram contato com o FVIII, pacientes que receberam até 4 dias de exposição ao fator VIII e grupo controle, sugerindo uma resposta imunológica modulada a partir da tentativa de controle da hemostasia nos pacientes com hemofilia A.
Abstract
Congenital hemophilia is a hemorrhagic disease resulted from deficiency of factor VIII (FVIII) in hemophilia A or IX (FIX) in individuals with hemophilia B. Hemophilia requires frequent infusions of FVIII or FIX concentrates for prophylaxis and/or treatment of hemorrhage. However, during treatment, approximately 30% and 5% of patients with hemophilia A and B, respectively, develop antibodies (inhibitors) which inhibit the coagulant activity of the infused factor promoting ineffective factor replacement. The pathophysiology related to the development of inhibitors is poorly understood. Previous studies have evaluated the immune profile of patients with hemophilia, but no study followed this profile at different stages of the disease. This project aims to evaluate the immunological profile of previously untreated patients before the start of factor replacement. For this, 32 patients were included in the hemophilia centers of Minas Gerais, Espirito Santo, Paraná and Rio de Janeiro, of which 28 (87.5%) with hemophilia A and 4 patients (12.5%) with hemophilia B. Upon inclusion, 22 (68.8%) patients received no factor VIII infusion and 10 (31.2%) had at most 4 days of exposure to factor VIII. The leukocyte phenotypic profile of 19 (59.4%) patients was assessed by using flow cytometry immunophenotyping. Furthermore, we also measured cytokines, chemokines and microparticles (MPs) in 28 (87.5%) patients with hemophilia A (PHA) and 47 controls, also by flow cytometry. We observed that the phenotypic profile of leukocytes in patients with hemophilia A is heterogeneous. Increased levels of MPs of platelets, leukocytes, T lymphocytes, neutrophils, monocytes and erythrocytes were found in previously untreated patients (0DE) when compared to controls (p <0.05). We also observed higher levels of IL-4, IL-6, IL-8 and IL-10 and lower levels of the MIG patients compared to controls (p <0.05). Patients with more than one exposure day to factor VIII (>1DE) showed elevated levels of IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF, IFN- and IL-2 compared to controls, including a reduction in the levels of MIG. In conclusion, we found that the immune profile modulated by cytokines and chemokines differ between previously untreated patients with hemophilia A, patients who had less than four exposure days to factor VIII and control group. This suggests that an immune response develops as a result from the attempt to control hemostasis in patients with hemophilia.
Assunto
Hemofilia A, Micropartículas Derivadas de Células, Citocinas, Quimiocinas, Imunofenotipagem
Palavras-chave
hemofilia, micropartículas, citocinas, quimiocinas, imunofenotipagem