Avaliação do papel da proteína Cinase associada ao receptor de interleucina-1 4 (IRAK-4) na resposta imuneinata durante a infecção causada pela bactéria intracelular Brucella abortus.
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Marco Antonio da Silva Campos
Karina Ramalho Bortoluci
Maria de Fatima Martins Horta
Gustavo Batista de Menezes
Karina Ramalho Bortoluci
Maria de Fatima Martins Horta
Gustavo Batista de Menezes
Resumo
A Cinase Associada ao Receptor de Interleucina-1 4 (IRAK-4) uma proteína cinase que possui um papel fundamental na resposta imune, como mediadora da sinalizador intracelular via receptor de IL-1 e receptores do tipo Toll (TLR). Este trabalho teve como objetivo determinar a participaçao de IRAK-4 na resposta imune inata durante ainfecão causada pela bacteria intracelular Brucella abortus. Camundongos deficientes em IRAK-4 (IRAK-4-/-) e camundongos heterozigotos para esta molecula (IRAK-4+/-) foram infectados com B. abortus S2308. Foi possível observar, uma semana apos a infecção, que os animais IRAK-4-/- apresentaram um maior numero de bacterias recuperadas do baço quando comparado aos animais IRAK-4+/-. Entretanto, após 3 e 6 semanas, os animais foram capazes de controlar a infecão de maneira similar aos animais controle. Além disso, foi avaliada in vivo e in vitro a produzir o de citocinas pertencentes ao perfil imunologico de resposta do tipo 1, importante para o controle da brucelose. Os animais deficientes em IRAK-4 apresentaram uma menor produção de IL-12 sistêmica, bem como uma menor produção de IFN- e TNF- pelas celulas esplênicas. Contudo, a maior diferença naprodução IFN- entre os animais IRAK-4+/- e IRAK-4-/- foi observada na 1 semana de infecção, coincidente com a maior susceptibilidade dos animais IRAK-4-/- neste período. Essa redução da produção de IFN- pelos camundongos IRAK-4-/- foi observada em linfitos T CD4+, T CD8+ e em células NK1.1+/CD3-, indicando a participação de IRAK-4 na ativação destes tipos celulares. A produção de IL-12 e TNF-, analisada no sobrenadante dos macrófagos e células dendríticas dos animais IRAK-4-/-, foi drasticamente reduzida. Além disso, a fosforilação das MAP cinases, ERK1/2 e p38, e da subunidade p65 do NF-B em macrófagos provenientes de animais IRAK-4-/- estimuladoscom B. abortus, demonstrou ser dependente de IRAK-4. Paralelamente, observou-se ainda VIII um total bloqueio da ativação dessas vias nos macrófagos deficientes em MyD88. Os resultados obtidos demonstram que IRAK-4 crucial para o controle inicial da infecção por B. abortus, porém o controle da infecçaão em fases mais tardias demonstrou não ser dependente desta moléula.
Abstract
Interleukin-1 receptor associated kinase 4 (IRAK-4) is a kinase that plays an important role in immune responses as a mediator on cellular signaling in responses to IL-1 receptor and various TLR ligands. This study aimed to determine the role of the IRAK-4 in host innate immune response against Brucella abortus infection. IRAK-4 knockout mice(IRAK-4-/-) and heterozygous mice (IRAK-4+/-) were infected with Brucella abortus strain S2308. Herein, it was shown that the number of colony-forming units (CFU) in IRAK-4-/- mice spleen was higher compared to IRAK-4+/- animals only at one week post-infection. At3 and 6 weeks post-infection, knockout mice were able to control the infection as the heterozygous mice. Furthermore, it was evaluated in vivo and in vitro production of type 1 cytokines crucial for brucellosis control. IRAK-4 deficient mice (IRAK-4-/-) showed lower production of systemic IL-12, and lower production of IFN- and TNF- by spleen cellswhen compared to IRAK-4+/- mice. However, the difference in IFN- production between IRAK-4+/- and IRAK-4-/- animals was higher only at first week post-infection, in agreement with the increased susceptibility of IRAK-4-/- mice. That reduction of IFN- production by IRAK-4-/- mice was observed in CD4+, CD8+ T cells and NK1.1+CD3- cells, indicating theinvolvement of IRAK-4 in activation of those cells. Also, the production of IL-12 and TNF- by macrophages and dendritic cells from IRAK-4-/- mice was abolished at 24hrs after stimulation with B. abortus. Additionally, macrophages from IRAK-4-/- mice stimulated with B. abortus, showed a deficient phosphorylation of MAPK, ERK1/2 and p38, and p65 subunit of NF-B. Furthermore, macrophages from MyD88 deficient mice also demonstrated total absence of MAPK and NF-B activation. Therefore, the results summarized in this study suggest that the IRAK-4 molecule is critical to trigger the initial immune response against B. abortus but not to late phases of infection.
Assunto
Bioquímica, Receptores Toll-Like, Sinalização intracelular, Brucella abortus
Palavras-chave
Bioquímica e Imunologia