Validação de teste de PCR em tempo real para diagnóstico da raiva dos herbívoros e seu perfil epidemiológico em Minas Gerais
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Validation of real-time PCR test for diagnosis of herbivores rabies and Its epidemiological profile in Minas Gerais
Primeiro orientador
Membros da banca
Tiago Facury Moreira
Rodrigo de Souza Ferreira
Maria Isabel Maldonado Coelho Guedes
Fernanda do Carmo Magalhães
Rodrigo de Souza Ferreira
Maria Isabel Maldonado Coelho Guedes
Fernanda do Carmo Magalhães
Resumo
A raiva é uma zoonose viral de alta letalidade, causada pelo Lyssavirus rabies (RABV), pertencente ao gênero Lyssavirus. Como uma doença neurotrópica, o RABV demonstra afinidade pelo sistema nervoso central (SNC), o que resulta em encefalomielite progressiva e fatal, podendo afetar todos os mamíferos, incluindo seres humanos. Dada a letalidade de quase 100%, diagnosticar a raiva com rapidez e precisão é crucial para o controle e prevenção. A Imunofluorescência Direta (IFD) é o teste padrão-ouro para o diagnóstico, recomendado pela Organização Mundial da Saúde (OMS) devido à sua alta sensibilidade e especificidade. No entanto, fatores como a qualidade das amostras, a preservação adequada, a habilidade técnica necessária para a leitura das lâminas e a presença de baixa carga viral pode afetar os resultados, o que destaca a necessidade de métodos diagnósticos complementares. O teste de Inoculação em Camundongos (IC) é amplamente adotado como método confirmatório à IFD na maioria dos laboratórios brasileiros. Embora eficaz, o IC apresenta limitações éticas e operacionais, como o uso de animais e o tempo prolongado necessário para a obtenção dos resultados. Em resposta a essas limitações, a OMS recentemente recomendou o ensaio de RT-qPCR LN34 Pan-Lyssavirus como uma alternativa moderna e eficiente para confirmação do diagnóstico da raiva. Este ensaio se destaca pela sua alta sensibilidade e especificidade diagnóstica, sendo capaz de detectar de modo universal todos os Lyssavirus, mesmo em amostras com carga viral reduzida e em condições avançadas de autólise. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo validar e comparar o desempenho do ensaio LN34 em relação ao teste de IFD em amostras de SNC de herbívoros com suspeita de raiva, encaminhadas ao Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA) para diagnóstico da doença no estado de Minas Gerais. Adicionalmente, verificar se o ensaio LN34 possui as qualidades necessárias como prova comprobatória à IFD. A pesquisa analisou 149 amostras de SNC, das quais 55 resultaram positivas no teste de IFD e 94 negativas. No ensaio de RT-qPCR LN34, 64 amostras apresentaram resultado positivo, 74 foram negativas e 11 foram inconclusivas. Os resultados indicaram que o ensaio LN34 apresentou sensibilidade de 96,36% e especificidade de 78,70%. A baixa especificidade foi atribuída às condições inadequadas de armazenamento das amostras, resultando em um aumento na quantidade de resultados discordantes entre os testes. Ademais, devido à alta sensibilidade do LN34, algumas amostras identificadas como positivas por este método foram negativas na IFD. Essas amostras apresentaram uma carga viral baixa, potencialmente não detectada pelo método de referência, mas identificada pelo ensaio LN34, resultando na classificação de amostras negativas na IFD como positivas no LN34. Conclui-se que o LN34 tem potencial como teste confirmatório à IFD,
mas a precisão dos resultados depende do armazenamento adequado e da realização rápida do teste após a coleta.
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Herbívoro, Raiva, Ciência Animal
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