Caracterização biológica e molecular de tripomastigotas de Trypanosoma cruzi provenientes de células deficientes na proteína lisossomal LAMP
Carregando...
Data
Autor(es)
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Walderez Ornelas Dutra
Daniella Castanheira Batholomeu
Carlos Andre Ornelas Ricart
Igor de Almeida
Daniella Castanheira Batholomeu
Carlos Andre Ornelas Ricart
Igor de Almeida
Resumo
O Trypanosoma cruzi invade células fagocíticas não profissionais através da subversão do processo de reparo de membrana da célula hospedeira, o qual é dependente de lesões à membrana plasmática e sinalização celular, aumento intracelular de cálcio e recrutamento de lisossomos. Células deficientes em LAMP (Lysosome Associated Membrane Proteins – LAMP) 1 e 2, são menos permissivas à invasão pelo T. cruzi, porém mais propensas à multiplicação intracelular deste parasito. O que determina essa maior multiplicação não é conhecido. No entanto, sabe-se que várias passagens por ambientes intracelulares diferentes pode, significativamente, mudar o perfil de expressão de genes do T. cruzi. Neste trabalho, nós avaliamos se uma única passagem por fibroblastos selvagens (WT) ou deficientes em LAMP (KO) poderia influenciar a capacidade de invasão de tripomastigotas da cepa Y de T. cruzi em mioblastos L6 e fibroblastos WT. Parasitos liberados de células LAMP-2 KO (TcY-L2-/-) apresentaram maiores taxas de invasão, sinalização de cálcio e injúria à membrana celular, em mioblastos L6, quando comparados àqueles liberados de fibroblastos WT (TcY-WT) ou LAMP-1/2 KO (TcY-L1/2-/-). Por outro lado, TcY-L1/2-/- apresentou maiores taxas de invasão, sinalização de cálcio e injúria à membrana celular, em fibroblastos WT, quando comparados aos outros parasitos. TcY-WT, por outro lado, embora tenha apresentado taxas de invasão e de sinalização de cálcio intermediárias em fibroblastos WT, induziram menores níveis de injúria, reforçando que a sinalização mediada por proteínas tem também contribuição importante para a indução de sinais de cálcio pelo parasito. Estes resultados claramente demonstram que parasitos liberados de fibroblastos WT ou LAMP KO são distintos uns dos outros. Adicionalmente, a capacidade de invasão destes parasitos também pode variar dependendo de quais tipos celulares eles interagem. Como estas alterações provavelmente refletem diferenças entre as moléculas de superfície do parasito, nós também avaliamos seus subproteomas. Alguns complexos proteicos, proteínas de membrana e proteínas secretadas foram encontrados regulados, como alguns membros das famílias MASP, mucinas, trans-sialidases e GP63, os quais desempenham um importante papel durante a infecção pelo parasito.
Abstract
Trypanosoma cruzi invades non-professional phagocytic cells by subverting their membrane repair process, which is dependent on membrane injury and cell signaling, intracellular calcium increase and lysosome recruitment. Cells lacking Lysosome Associated Membrane Proteins 1 and 2 (LAMP-1 and LAMP-2) are less permissive to parasite invasion, however more prone to parasite intracellular multiplication. Several passages through a different intracellular environment can significantly change T. cruzi’s gene expression profile. Here, we evaluated whether one single passage through LAMP deficient (KO) or wild type (WT) fibroblasts could influence invasion ability of T. cruzi Y strain trypomastigotes in L6 myoblasts and WT fibroblasts. Parasites released from LAMP-2 KO cells (TcY-L2-/-) showed higher invasion, calcium signaling and membrane injury rates when compared to those released from WT (TcY-WT) or LAMP-1/2 KO cells (TcY-L1/2-/-) in L6 myoblasts. On the other hand, TcY-L1/2-/- showed higher invasion, calcium signaling and cell membrane injury rates compared to the others in WT fibroblasts. TcY-WT, on the other hand, although presented an intermediary invasion and calcium signaling rates in WT cells, induced lower levels of injury, reinforcing that protein signaling also have a significant contribution to parasite induced calcium signals. These results clearly show that parasites released from WT or LAMP KO cells are distinct from each other. Additionally, these parasites ability to invade the cell may be distinct depending with which cell type they interact with. Since these alterations most likely would reflect differences among parasite surface molecules, we also evaluated their subproteome. Few protein complexes, membrane and secreted proteins were found regulated, such as some members of MASP, mucins, trans-sialidases and gp63 proteins family, which may play an important role during parasite infection.
Assunto
Biologia celular, Doença de Chagas, Tryoanosoma cruzi, Espaço intracelular, Glicoproteínas de membrana associadas ao lisossomo
Palavras-chave
Trypanosoma cruzi, Doença de Chagas, Proteínas LAMP, Invasão, Ambiente intracelular, Análise proteômica, TMT (tandem mass tags)