Determinação de losartana e valsartana em plasma humano empregando extração em fase sólida à base de nanotubos de nitreto de boro e cromatografia a líquido de alta eficiência.
Carregando...
Data
Autor(es)
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Eduardo Costa de Figueiredo
José Eduardo Gonçalves
José Eduardo Gonçalves
Resumo
A determinação de fármacos em fluídos biológicos pode ser feita com diferentes propósitos. Todavia, a complexidade dessas matrizes pode tornar a etapa de preparo de amostras desafiadora. A extração em fase sólida tem sido uma das principais técnicas de extração de moléculas nos mais diversos tipos de amostras líquidas. Apesar dos avanços alcançados com o desenvolvimento de diversos dispositivos miniaturizados de SPE, os principais sorventes empregados são baseados em reagentes organosilanos, quimicamente ligados à superfície da sílica. Devido às limitações inerentes a esses sorventes, o desenvolvimento de novas fases extratoras tornou-se uma alternativa viável para o aprimoramento da técnica. No presente estudo, determinaram-se losartana e valsartana em plasma humano, os dois fármacos da classe dos antagonistas dos receptores da angiotensina II mais empregados na prática clínica. Esses fármacos foram extraídos em cartuchos para extração em fase sólida, contendo nanotubos de nitreto de boro funcionalizados com grupos octadecila como sorvente, e analisados por cromatografia a líquido de alta eficiência acoplada a detector de fluorescência. As condições de extração otimizadas, obtidas por meio de planejamento fatorial, foram 60 mg de nanosorvente; 2 mL de metanol para a ativação da fase sólida; 500 μL de tampão fosfato de potássio monobásico anidro 10 mM pH 2 para o condicionamento dos cartuchos; vazão de, aproximadamente, 0,3 mL/min para a passagem das amostras; 250 μL de mistura de tampão fosfato de potássio monobásico anidro 10 mM pH 2 e metanol (90:10) para a etapa de lavagem; e 2 mL de metanol para a eluição dos fármacos. Entre uma extração e outra, 1 mL de acetonitrila foram passados pelos cartuchos para a remoção de compostos interferentes fortemente retidos pelo nanosorvente. A irbesartana foi empregada como padrão interno. As condições cromatográficas do método bioanalítico permitiram a separação dos compostos de interesse e compostos interferentes com resolução e tempo de corrida satisfatórios. As condições cromatográficas empregadas foram: coluna analítica contendo fase estacionária com grupos bifenila, do tipo core-shell (100 x 4,6 mm; 2,6 μm); fase móvel composta por solução de trietilamina 0,1% (v/v) e metanol (pH 3,2), com eluição em gradiente, na vazão de 0,7 mL/min; volume de injeção de 10 μL; temperatura de 25 ± 3 °C; e comprimento de onda de excitação de 250 nm e de emissão de 375 nm. A avaliação das figuras de mérito, segundo as recomendações dos guias nacionais e internacionais de validação, possibilitou observar linearidade, precisão e exatidão, nas faixas de concentração de 50 – 1200 ng/mL para losartana e 20 – 1700 ng/mL para valsartana. A aplicabilidade do método foi confirmada por meio da análise de amostras de plasma de pacientes sob terapia anti-hipertensiva.
Abstract
The determination of drugs in biological fluids can be done for different purposes. However, the
complexity of these matrices can make the sample preparation step challenging. Solid phase extraction has
been one of the main techniques for extracting molecules from the most diverse types of liquid samples.
Despite the advances achieved with the development of several miniaturized solid phase extraction devices,
the main sorbents used are based on organosilane reagents, chemically bonded to the silica surface. Due to
the inherent limitations of these sorbents, the development of new extracting phases has become a viable
alternative to improve the technique. In the present study, losartan and valsartan were determined in human
plasma, the two drugs of the class of angiotensin II receptor antagonists most used in clinical practice.
These drugs were extracted in cartridges for solid phase extraction, containing boron nitride nanotubes
functionalized with octadecyl groups as sorbent, and analyzed by high-performance liquid chromatography
coupled with a fluorescence detector. The optimized extraction conditions, obtained through factorial
design, were 60 mg of nanosorbent; 2 mL methanol for solid phase activation; 500 µL of potassium
phosphate monobasic anhydrous buffer 10 mM pH 2 for cartridge conditioning; flow rate of approximately
0.3 mL/min for the passage of samples; 250 µL of a mixture of potassium phosphate monobasic anhydrous
buffer 10 mM pH 2 and methanol (90:10) for the wash step; and 2 mL of methanol for drug elution.
Between one extraction and another, 1 mL of acetonitrile was passed through the cartridges to remove
interfering compounds strongly retained by the nanosorbent. Irbesartan was used as an internal standard.
The chromatographic conditions of the bioanalytical method allowed the separation of compounds of
interest and interfering compounds with satisfactory resolution and running time. The chromatographic
conditions used were: core-shell biphenyl analytical column (100 x 4.6 mm; 2.6 µm); mobile phase
composed of 0.1% (v/v) triethylamine and methanol (pH 3.2), in gradient elution, at 0.7 mL/min; injection
volume of 10 µL; temperature 25 ± 3 °C; and 250 nm excitation and 375 nm emission wavelengths. The
evaluation of the figures of merit, according to the recommendations of the national and international
validation guidelines, made it possible to observe linearity, precision and accuracy, in the concentration
ranges of 50 – 1200 ng/mL for losartan and 20 – 1700 ng/mL for valsartan. The applicability of the method
was confirmed through the analysis of plasma samples from patients undergoing antihypertensive therapy.
Assunto
Palavras-chave
Extração em fase sólida, Nanotubos de nitreto de boro, Grupos octadecila, Plasma humano, Planejamento fatorial