Ômega-conotoxina MVIIC no trauma experimental da medula espinhal.
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Benito Soto Blanco
Carla Maria Osório Silva
Carla Maria Osório Silva
Resumo
O trauma medular é uma afecção comum na medicina veterinária. Ela pode acarretar graves consequências tais como déficit na função motora sensorial e autonômica para o animal acometido e pode determinar a eutanásia do mesmo. As lesões medulares causam danos no tecido nervoso por mecanismos primário e secundário. A lesão primaria e de tipo irreversível, já no mecanismo secundário um influxo exacerbado de cálcio é produzido, principalmente devido à ativação de canais para cálcio voltagem-dependentes (CCVD). Esse evento é considerado crítico na fisiopatogênia da lesão medular. A Ômega-conotoxina MVIIC obtida da purificação do veneno de Conus magus é capaz de bloquear CCVD e, assim, reduzir o influxo de cálcio. O presente estudo avaliou o efeito da aplicação intratecal da Ômega-conotoxina MVIIC nas doses 15 e 30 pmol e nos tempos 5 minutos e uma hora após o trauma medular experimental em ratos. Foram utilizados 36 ratos machos adultos, variedade Wistar, aleatoriamente divididos em seis grupos. Os animais do grupo Controle Negativo (CN) foram submetidos à laminectómica dorsal. Nos demais grupos, além da laminectómica, os animais foram submetidos ao trauma medular agudo contusivo pelo aparelho MASCIS impactor. Realizou-se aplicação intratecal de placebo nos animais dos grupos Controle Positivo (CP). Nos Grupos G3 e G5 foram aplicadas doses de 15 e 30 pmol, respectivamente, da toxina Ômega-conotoxina MVIIC, nos animais tratados 5 minutos após o trauma. Nos Grupos G4 e G6 foram aplicadas as doses de 15 e 30, respectivamente, uma hora após o trauma. Os animais foram eutanasiados 48 horas após a intervenção cirúrgica e a aplicação da toxina. Por fim, coletaram-se amostras de sangue para avaliar os efeitos secundários, e segmentos de medula espinhal, para quantificação de espécies reativas de oxigênio e peroxidação lipídica e para a avaliação da expressão gênica de fatores relacionados à apoptose por meio de técnica de qRT-PCR. Observou-se redução na produção de ERO´s no grupo tratado com 15 pmol/5 minutos após o trauma, o que sugere tendência de redução dos níveis de ERO's, o que, provavelmente, estaria relacionado à redução dos eventos patogênicos devido ao acúmulo intracelular de cálcio pelo bloqueio de CCVD.
Abstract
Spinal cord trauma is a common condition in veterinary medicine. It can lead to serious
consequences such as deficits in sensory and autonomic motor function for the affected animal
and can determine the euthanasia of the affected animal. Marrow lesions cause damage to nerve
tissue by primary and secondary mechanisms. The primary and irreversible lesion, already in the
secondary mechanism an exacerbated influx of calcium is produced, mainly due to the activation
of voltage-dependent calcium channels (CCVD). This event is considered critical in the
pathophysiology of spinal cord injury. The Omega-conotoxin MVIIC obtained from the
purification of the venom of Conus magus is able to block CCVD and thus reduce the influx of
calcium. The present study evaluated the effect of intrathecal application of omega-conotoxin
MVIIC at doses 15 and 30 pmol and at the times 5 minutes and one hour after the experimental
bone marrow trauma in rats. Thirty - six adult male Wistar rats were randomly divided into six
groups. The animals of the Negative Control (CN) group were submitted to dorsal laminectomy.
In the other groups, in addition to laminectomy, the animals were submitted to acute medullary
trauma by the device MASCIS impactor. Intrathecal application of placebo was performed in the
animals of the Positive Control (CP) groups. In Groups G3 and G5 doses of 15 and 30 pmol,
respectively, of the Omega-conotoxin toxin MVIIC, were applied in the treated animals 5 minutes
after the trauma. In Groups G4 and G6 doses of 15 and 30, respectively, were applied one hour
after the trauma. The animals were euthanized 48 hours after the surgical intervention and the
application of the toxin. Finally, blood samples were collected to evaluate the side effects and
spinal cord segments for the quantification of reactive oxygen species and lipid peroxidation and
for the evaluation of the gene expression of factors related to apoptosis by means of the qRTPCR. There was a reduction in ROS production in the treated group at 15 pmol / 5 minutes post
trauma, suggesting a tendency to reduce ROS levels, which would probably be related to the
reduction of the pathogenic events due to the intracellular accumulation of calcium by blocking
CCVD.
Assunto
Trauma medular
Palavras-chave
Trauma Medular, Neuroproteção, Ômega-conotoxina MVIIC, Cálcio, Apoptose, Peroxidação Lipídica, Espécies Reativas de Oxigênio