Análise preliminar de antígeno recombinante e peptídeos sintéticos aplicados no diagnóstico da leishmaniose tegumentar utilizando urina dos pacientes
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Mario da Silva Giusta
Nathália Coral Galvani
Nathália Coral Galvani
Resumo
As leishmanioses são doenças endêmicas que acometem cerca de um bilhão de pessoas em mais de 90 países no mundo. A leishmaniose tegumentar (LT) é a forma mais comum e exibe ampla variabilidade clínica, impactando a saúde e qualidade de vida dos pacientes de maneira significativa. O diagnóstico precoce é essencial para o tratamento eficaz e prevenção de casos graves. Entretanto, o diagnóstico parasitológico convencional ou molecular tem coleta invasiva de amostras biológicas, apresenta sensibilidade e especificidade variáveis e/ou possui custo elevado. Ensaios imunoenzimáticos são alternativas, ainda que existam problemas relacionados a sensibilidade dos testes e a necessidade da coleta de sangue considerada invasiva. Nesse sentido, a identificação de novos antígenos para serem usados na melhoria do diagnóstico da LT seria atraente, bem como o uso de amostras biológicas coletadas de forma não-invasiva. Desta forma, no presente trabalho, a proteína fator de iniciação eucariótico 5a (eIF5A), previamente identificada por imunoproteômica em Leishmania braziliensis, bem como seu epítopo específico de linfócitos B predito por bioinformática, foram testados para o diagnóstico da LT utilizando urina dos pacientes em comparação ao uso de soro. A técnica de ELISA indireta foi realizada com a proteína recombinante, seu peptídeo e o extrato antigênico solúvel dos parasitos (SLA). O uso da urina apresentou melhores valores de sensibilidade e especificidade quando comparado ao uso do soro, apresentando valores de sensibilidade de 100%, 76,2% e 95,56%, e especificidade de 100%, 86,7% e 100% para a proteína reIF5A, peptídeo sintético e SLA, respectivamente. Enquanto o uso do soro demonstrou valores de 79,07%, 76,19% e 77,27% de sensibilidade, e especificidade de 100%, 88,89% e 95,35% respectivamente para a proteína, peptídeo e SLA. A proteína recombinante mostrou melhores valores em comparação aos demais antígenos, e a ELISA baseada em urina apresentou valores ligeiramente superiores ao uso do soro. Desta forma, o presente estudo fornece dados preliminares da possibilidade de uso da proteína reIF5A e urina para o diagnóstico da LT.
Abstract
Leishmaniasis are endemic diseases that affect approximately one billion people in over 90 countries worldwide. Tegumentary leishmaniasis (TL) is the most common form and exhibits wide clinical variability, significantly impacting the health and quality of life of patients. Early diagnosis is essential for effective treatment and prevention of severe cases. However, conventional parasitological or molecular diagnosis involves invasive collection of biological samples, has variable sensitivity, and/or is costly. Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) are alternatives, although issues related to test sensitivity and the need for invasive blood collection exist. In this regard, the identification of new antigens for improving TL diagnosis would be attractive, as well as the use of non-invasively collected biological samples. In this study, the eukaryotic initiation factor 5a (eIF5A) protein, previously identified by immunoproteomics in Leishmania braziliensis, along with its B-cell-specific epitope predicted by bioinformatics, were tested for TL diagnosis using patient urine compared to serum. Indirect was performed with the recombinant protein, its peptide, and the soluble antigenic extract of parasites (SLA). The use of urine showed better sensitivity and specificity values compared to serum, with sensitivity values of 100%, 76.2%, and 95.56%, and specificity of 100%, 86.7%, and 100% for the reIF5A protein, synthetic peptide, and SLA, respectively. In contrast, the use of serum demonstrated sensitivity values of 79.07%, 76.19%, and 77.27%, and specificity of 100%, 88.89%, and 95.35% for the protein, peptide, and SLA, respectively. The recombinant protein showed better values compared to other antigens, and the urine-based ELISA had slightly higher values than serum usage. Thus, this study provides preliminary data on the possibility of using reIF5A protein and urine for the diagnosis of LT.
Assunto
Leishmaniose Cutânea, Testes Imunológicos, Urina, Proteínas Recombinantes, Peptídeos, Dissertação Acadêmica
Palavras-chave
Leishmaniose Tegumentar, Diagnóstico, Urina, Soro, Proteína Recombinante, Peptídeo Sintético, Sensibilidade, Especificidade
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