Caracterização do papel do miRNA let-7a-5p no controle da resposta imune e inflamatória na hanseníase
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Resumo
A Hanseníase é uma doença crônica e infecto contagiosa, tendo como agente etiológico
a Mycobacterium leprae. Atualmente, é uma doença que, apesar de ter tido umgrande progresso
na diminuição de sua transmissão, ainda acomete um número consideravelmente grande de
pessoas. É caracterizada por um amplo espectro clínico que varia entre a forma de resistência
(tuberculóide -TT) e a forma de susceptibilidade (virchowiana – VV), que se manifestam sob
diferentes perfis de resposta imune. O controle da resposta imune envolve uma miríade de
processos celulares e teciduais e, dentre eles, o controle da expressão gênica é fator essencial.
Resultados prévios demonstram que existe um papel importante de miRNAs, pequenos RNAs
não codificantes, nas formas polares da hanseníase. Previamente, identificamos o perfil de
expressão de miRNAs diferencial em pacientes com as formas polares da hanseníase (TT e VV)
e indivíduos controle não doentes, e estes perfis foram utilizados para identificar, in silico, vias
celulares enriquecidas e que pudessem estar relacionadas à fisiopatologia da doença. Dentre
essas vias, destacam-se as vias de reconhecimento de patógenos ou de PAMPs, como a
sinalização mediada por TLR4 (Toll-like receptor 4). Esta via possui um regulador central, o
let-7a-5p, que possui como alvo o próprio receptor TLR4 e apresenta-se diferencialmente
expresso nas formas clínicas da doença. Nesse sentido, considerando que let-7a-5p pode ter
uma função importante na regulação do reconhecimento do patógeno por TLR4, nas formas
clínicas polares da hanseníase, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a função do miRNA
let-7a-5p no controle da sinalização celular mediada por TLR4 e correlacionar com a
fisiopatologia da hanseníase. Para tanto foram padronizados sistemas in vitro, em cultura de
células HEK293T e L929. Os resultados demonstram que TLR4 é um alvo do miRNA e pode
ter sua expressão controlada, pelo menos em parte, por let-7a-5p. Além disso, a presença do
mímico de let-7a-5 é capaz de inibir parcialmente o aumento de CXCL1, após o estímulo de
fibroblastos L929 com LPS, e observamos também a alteração da expressão do miRNA após o
estímulo das células com LPS e a alteração de mRNA de TLR4 em células tratadas com o
mímico do miRNA. Os resultados gerados neste trabalho demonstram que let-7a-5p é um
controlador da resposta inflamatória mediada por TLR4 na hanseníase.
Abstract
Leprosy is a chronic and contagious infectious disease, whose etiological agent is
Mycobacterium leprae. Currently, it is a disease that, despite having made great progress in
reducing its transmission, still affects a considerably large number of people. It is characterized
by a wide clinical spectrum that varies between the form of resistance (tuberculoid -TT) and the
form of susceptibility (virchowian -VV), which manifest in different profiles of immune
response. The control of the immune response involves a myriad of cellular and tissue processes
and, among them, the control of gene expression is an essential factor. Previous results
demonstrate that there is an important role for miRNAs, small non-coding RNAs, in the polar
forms of leprosy. Previously, we identified the differential expression profile of miRNAs in
patients with the polar forms of leprosy (TT and VV) and non-ill control subjects, and these
profiles were used to identify, in silico, enriched cellular pathways that could be related to the
pathophysiology of the disease. Among these pathways, the recognition pathways of pathogens
or PAMPs stand out, such as signaling mediated by TLR4 (Toll-like receptor 4). This pathway
has a central regulator, let-7a-5p, which targets the TLR4 receptor itself and is differentially
expressed in the clinical forms of the disease. In this sense, considering that let-7a-5p may play
an important role in regulating the recognition of the pathogen by TLR4, in the polar clinical
forms of leprosy, the objective of this work was to characterize the function of the miRNA let-
7a-5p in the signaling control cell mediated by TLR4 and correlate with the pathophysiology of
leprosy. For this purpose, in vitro systems were standardized in HEK293T and L929 cell
cultures. The results demonstrate that TLR4 is a miRNA target and may have its expression
controlled, at least in part, by let-7a-5p. Furthermore, the presence of the let-7a-5 mimic is
capable of partially inhibiting the increase in CXCL1 after stimulating L929 fibroblasts with
LPS, and we also observed changes in miRNA expression after stimulating cells with LPS and
TLR4 mRNA alteration in cells treated with the miRNA mimic. The results generated in this
work demonstrate that let-7a-5p is a controller of the TLR4-mediated inflammatory response in
leprosy.
Assunto
Genética, Hanseníase, Mycobacterium leprae, MicroRNAs, Receptor 4 Toll-Like
Palavras-chave
Hanseníase, miRNAs, Mycobacterium leprae, TLR4
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