Trypanosoma brucei and Trypanosoma cruzi DNA Mismatch Repair Proteins Act Differently in the Response to DNA Damage Caused by Oxidative Stress
Carregando...
Data
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Artigo de periódico
Título alternativo
As proteínas de reparo de erros de pareamento do DNA de Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi atuam de forma diferente na resposta a danos no DNA causados por estresse oxidativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Resumo
A MSH2, associada à MSH3 ou MSH6, é um componente central da via de Reparo de Erros de Pareamento (MMR) do DNA eucariótico, responsável pelo reconhecimento e correção de erros de pareamento de bases que ocorrem durante a replicação e recombinação do DNA. Estudos anteriores demonstraram que a MSH2 desempenha um papel adicional no reparo do DNA em resposta a danos oxidativos em Trypanosoma cruzi e Trypanosoma brucei . Por meio de coimunoprecipitação seguida de espectrometria de massa com parasitas expressando proteínas marcadas, confirmamos que a MSH2 dos parasitas forma complexos com MSH3 e MSH6. Para investigar o envolvimento desses dois outros componentes da MMR na resposta ao estresse oxidativo, geramos mutantes knockout de MSH6 e MSH3 em formas sanguíneas de T. brucei e mutantes de MSH6 em epimastigotas de T. cruzi . Diferentemente do fenótipo observado em epimastigotas de T. cruzi com deleção do gene MSH2, a perda de um ou dois alelos de T. cruzi msh6 resultou em maior suscetibilidade à exposição ao H₂O₂, além de comprometimento do sistema de reparo de erros de pareamento (MMR). Em contraste, mutantes nulos de T. brucei msh6 ou msh3 apresentaram maior tolerância ao tratamento com MNNG, indicando que o MMR é afetado, mas sem diferença na resposta ao tratamento com H₂O₂ quando comparados a células do tipo selvagem. Em conjunto, nossos resultados sugerem que, embora T. cruzi MSH6 e MSH2 estejam envolvidos na resposta ao estresse oxidativo , além de seu papel como componentes do MMR, a via de reparo do DNA que lida com danos por estresse oxidativo opera de maneira diferente em T. brucei .
Abstract
MSH2, associated with MSH3 or MSH6, is a central component of the eukaryotic DNA Mismatch Repair (MMR) pathway responsible for the recognition and correction of base mismatches that occur during DNA replication and recombination. Previous studies have shown that MSH2 plays an additional DNA repair role in response to oxidative damage in Trypanosoma cruzi and Trypanosoma brucei. By performing co-immunoprecipitation followed by mass spectrometry with parasites expressing tagged proteins, we confirmed that the parasites' MSH2 forms complexes with MSH3 and MSH6. To investigate the involvement of these two other MMR components in the oxidative stress response, we generated knockout mutants of MSH6 and MSH3 in T. brucei bloodstream forms and MSH6 mutants in T. cruzi epimastigotes. Differently from the phenotype observed with T. cruzi MSH2 knockout epimastigotes, loss of one or two alleles of T. cruzi msh6 resulted in increased susceptibility to H2O2 exposure, besides impaired MMR. In contrast, T. brucei msh6 or msh3 null mutants displayed increased tolerance to MNNG treatment, indicating that MMR is affected, but no difference in the response to H2O2 treatment when compared to wild type cells. Taken together, our results suggest that, while T. cruzi MSH6 and MSH2 are involved with the oxidative stress response in addition to their role as components of the MMR, the DNA repair pathway that deals with oxidative stress damage operates differently in T. brucei.
Assunto
Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei brucei, Reparo do DNA, Estresse oxidativo, Reparo de erro de pareamento de DNA
Palavras-chave
Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei, DNA mismatch repair, MSH2, MSH6, Oxidative stress
Citação
Departamento
Curso
Endereço externo
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology/articles/10.3389/fcimb.2020.00154/full