Identificação de novos antígenos de Leishmania infantum através da técnica de imunoproteômica com aplicação para o diagnóstico sorológico e composições vacinais contra a Leishmaniose Visceral Canina NA
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Resumo
As leishmanioses são doenças negligenciadas, sobretudo por estarem vigentes em países em desenvolvimento. O Brasil concentra a maioria dos casos do continente americano, tornando-a um problema de Saúde Pública. São ocasionadas por protozoários do gênero Leishmania. Os parasitos promovem diferentes manifestações clínicas, e isso se dá pela interação entre o parasito e a resposta imune do hospedeiro, bem como pela espécie que está parasitando. Isso posto, a leishmaniose visceral (LV) é atualmente a forma clínica mais grave, apresentando sintomas sistêmicos, que podem acabar levando ao óbito caso não seja tratada em tempo hábil, contudo, existem poucas opções terapêuticas realmente eficazes. Essa doença também pode atingir os cães, sendo eles os principais reservatórios. Atualmente possui uma alta prevalência de animais infectados nas cidades, sendo um grande potencial de risco para a transmissão da doença ao homem. Existem algumas estratégias de controle contra a doença preconizados pelo ministério da saúde, como uso de inseticidas para combater o vetor, o diagnóstico e tratamento dos casos registrados e eutanásia dos cães soro positivos. Entretanto, essas medidas não têm sido suficientes para redução da incidência da doença no Brasil. Sendo assim, um estudo de imunoproteômica utilizando parasitos de Leishmania infantum isolados de extratos proteicos de cães naturalmente infectados de uma região endêmica para a doença foram utilizados para a identificação de novos antígenos para serem utilizados futuramente no diagnóstico sorológico e como candidatos a vacina na leishmaniose visceral canina. Para a realização dos géis bidimensionais foram utilizados extratos proteicos de cães sintomáticos e assintomáticos e na realização do Western-Blotting, utilizou-se pool de soros de cães com leishmaniose visceral assintomática, sintomática, cães saudáveis de área endêmica, cães com doenças correlacionadas (babesiose e erliquiose) em cães imunizados com a vacina Leish-Tec®. Com os resultados adquiridos, foi possível excluir os spots que apresentaram reatividade cruzada dos soros dos grupos de cães saudáveis, com babesiose e erliquiose. Ao todo foi possível identificar 20 proteínas, sendo 15 já descritas na literatura e 5 delas hipotéticas. Portanto, o presente estudo revela novos candidatos com potencial para serem empregados em estudos futuros na melhoria do diagnóstico da leishmaniose visceral, bem como para serem aplicados em uma formulação vacinal.
Abstract
Leishmaniasis are neglected diseases, mainly because they are in force in developing countries. Brazil concentrates most cases on the American continent, making it a public health problem. They are caused by protozoa of the genus Leishmania. The parasites cause different clinical manifestations, and this is due to the interaction between the parasite and the host's immune response, as well as the species that is parasitizing. That said, visceral leishmaniasis (VL) is currently the most serious clinical form, presenting systemic symptoms, which can end up leading to death if it is not treated in a timely manner, however, there are few really effective therapeutic options. This disease can also affect dogs, which are the main reservoirs. It currently has a high prevalence of infected animals in cities, being a great risk potential for the transmission of the disease to humans. There are some control strategies against the disease recommended by the Ministry of Health, such as the use of insecticides to combat the vector, the diagnosis and treatment of registered cases and euthanasia of positive serum dogs. However, these measures have not been sufficient to reduce the incidence of the disease in Brazil. Thus, an immunoproteomics study using Leishmania infantum parasites isolated from protein extracts from naturally infected dogs from an endemic region for the disease were used to identify new antigens to be used in the future for serological diagnosis and as candidates for vaccine in visceral leishmaniasis canine. Protein extracts from symptomatic and asymptomatic dogs were used to perform the two-dimensional gels and in the Western Blotting, a pool of sera from dogs with asymptomatic, symptomatic visceral leishmaniasis was used, healthy dogs from an endemic area, dogs with correlated diseases (babesiosis and ehrlichiosis) in dogs immunized with the Leish-Tec® vaccine. With the acquired results, it was possible to exclude the spots that presented cross-reactivity of the sera of the groups of healthy dogs, with babesiosis and ehrlichiosis. Altogether it was possible to identify 20 proteins, 15 of which have already been described in the literature and 5 of which are hypothetical. Therefore, the present study reveals new candidates with the potential to be used in future studies to improve the diagnosis of visceral leishmaniasis, as well as to be applied in a vaccine formulation.Visando um novo teste de sorodiagnóstico e uma composição vacinal.
Assunto
Biomarcadores, Espectrometria de Massas, Proteômica, Leishmania, Dissertação Acadêmica
Palavras-chave
Biomarcadores, Espectrometria de Massas, Proteômica