Validação de L-(+)-bornesitol como marcador ativo de Hancornia speciosa: atividade hipotensora, estudo farmacocinético e de permeação
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tese de doutorado
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Resumo
L-(+)-Bornesitol é o constituinte majoritário do extrato etanólico de folhas de Hancornia speciosa Gomes (Apocynaceae), planta medicinal com atividade anti-hipertensiva comprovada. O presente trabalho teve como objetivo validar L-(+)-bornesitol como marcador ativo de H. speciosa, empregando estudos de farmacodinâmica e farmacocinética em ratos, e de permeação in vitro. O bornesitol foi isolado de um extrato em metanol / acetato de etila (1:1) de folhas de H. speciosa e sua pureza e identidade foram aferidos por métodos espectrométricos usuais (RMN de 1H e de 13C e MS). Para a realização dos estudos farmacocinéticos desenvolvemos e validamos um método bioanalítico para quantificar o bornesitol em plasma de rato por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrômetro de massas sequencial com ionização por electrospray (UPLC-ESI-MS/MS). O efeito hipotensor do bornesitol foi investigado em ratos Wistar normotensos. Bornesitol (0,1; 1,0 e 3,0 mg/kg i.v.) promoveu a redução da pressão arterial sistólica (PAS) e pressão arterial média (PAM) dos animais e seu mecanismo de ação foi caracterizado como resultante da inibição da atividade da enzima conversora de angiotensina e aumento da concentração de óxido nítrico. O método bioanalítico de UPLC-ESI-MS/MS/MS desenvolvido e validado utilizou modo de aquisição por Monitoramento de Reações Múltiplas (MRM) e ionização em modo negativo, e foi baseado em duas transições observadas para o analito, uma específica (m/z 193,1 → 161,0 Da) e outra confirmatória (m/z 193,1 → 125,0 Da). Pentaeritritol foi definido como padrão interno, sendo duas transições empregadas para sua análise, uma específica (m/z 135,1 → 87,3 Da) e outra confirmatória (m/z 135,1 → 69,3 Da). Para a realização do estudo farmacocinético, o plasma foi purificado por meio da precipitação de proteínas com acetonitrila. O método mostrou-se linear, exato, preciso, específico e sensível, sendo adequado para a determinação dos perfis plasmáticos do composto após diferentes doses e vias de administração. O bornesitol (3, 15 e 25 mg/Kg) administrado a ratos Wistar apresentou perfil farmacocinético não linear e com modelo bicompartimental. A permeabilidade do bornesitol foi avaliada in vitro em modelo transwell com células Caco-2. Quando avaliado isoladamente, o bornesitol apresentou baixa permeação, provavelmente devido à elevada hidrofilia do composto, de maneira semelhante à relatada para outros ciclitóis. A permeabilidade do bornesitol foi aparentemente aumentada quando este foi administrado associado com a rutina, ou como constituinte da matriz de uma fração padronizada de H. speciosa.
Abstract
Assunto
Palavras-chave
Hancornia speciosa, UPLC-ESI-MS/MS, Bornesitol, Plasma de rato, Estudo farmacocinético, Estudo de permeabilidade, Monocamada de células Caco-2