Análise da neoformação tecidual e de marcadores da inflamação e de dentinogênese em procedimento endodôntico regenerativo com ou sem uso de fibrina rica em plaquetas injetável em ratos imunossuprimidos
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Analysis of tissue neoformation and of inflammatory and dentinogenesis markers in regenerative endodontic procedure with or without injectable platelet-rich fibrin in immunosuppressed rats
Primeiro orientador
Membros da banca
Soraia Macari
Bruna de Athayde Casadei
Bruna de Athayde Casadei
Resumo
O procedimento endodôntico regenerativo (REP) busca restabelecer propriedades formativas, imunológicas e defensivas do complexo dentino-pulpar em dentes permanentes imaturos com polpa necrosada. Ocorre por meio da indução de um coágulo sanguíneo no interior do canal radicular, que trará células-tronco da região periapical e fatores de crescimento para a formação de um novo tecido. Contudo, condições sistêmicas como a imunossupressão podem prejudicar este processo de regeneração tecidual. Este estudo analisou a neoformação tecidual, a formação de tecido mineralizado e a imunomarcação para sialofosfoproteína dentinária (DSPP) e interleucina (IL)-1β em ratos imunossuprimidos após REP, com ou sem o uso de fibrina rica em plaquetas injetável (iPRF). Vinte e quatro ratos foram divididos entre aqueles sem imunossupressão e imunossuprimidos (ciclofosfamida; 50 mg/Kg). Em seguida, os animais foram divididos em grupos (n=6): REP, REP imunossuprimido (IM-REP), REP com iPRF (REP-iPRF) e REP imunossuprimido com iPRF (IM-REPiPRF). Após a indução de necrose pulpar, foi realizada antissepsia com hipoclorito de sódio 2,5% e ácido etilenodiaminotetracético 17%, seguida de medicação intracanal (MIC). Após 15 dias, a MIC foi removida e o sangramento intracanal induzido por sobreinstrumentação com lima tipo K #10; nos grupos REP-iPRF e IMREP- iPRF, a iPRF foi inserida no canal radicular antes da indução de sangramento. Os molares foram selados. Aos 21 dias, os animais foram eutanasiados, e os espécimes obtidos para análises histológicas (hematoxilina-eosina) e imunohistoquímica. Testes estatísticos foram aplicados (p<0,05). O grupo REP apresentou neoformação de tecido conjuntivo dentro dos canais radiculares até os terços médio e cervical; o grupo REP-iPRF, até o terço cervical; e IM-REP e IMREP-iPRF apresentaram neoformação tecidual apenas até o terço apical do canal radicular, com diferença significativa entre REP e IM-REP (p<0,05). Os espécimes de REP e REP-iPRF apresentaram neoformação de novo tecido mineralizado em comprimento e espessura do canal radicular; a maioria dos espécimes dos grupos IM-REP e IM-REP-iPRF apresentaram neoformação de tecido mineralizado apenas em comprimento ou espessura radicular, ou ausência desta; a diferença significativa foi observada entre os grupos REP-iPRF e IM-REP-iPRF (p<0,05). A maioria dos espécimes dos grupos REP e REP-iPRF apresentou imunomarcação moderada para DSPP; nos grupos IM-REP e IM-REP-iPRF, quase todos os espécimes também apresentaram imunomarcação moderada, sem diferença significativa entre os grupos (p>0,05). Todos os grupos apresentaram baixa imunomarcação para IL-1β (p>0,05). Conclui-se que a imunossupressão afetou negativamente a neoformação tecidual dentro dos canais radiculares e a formação de tecido mineralizado em molares imaturos de ratos após REP, mas não influenciou a presença de DSPP ou IL-1β; ainda, a iPRF não influenciou os resultados encontrados.
Abstract
The regenerative endodontic procedure (REP) aims to restore the formative, immunological, and defensive properties of the dentin-pulp complex in immature permanent teeth with necrotic pulp. It works by inducing a blood clot within the root canal, which brings stem cells from the periapical region and growth factors to promote the formation of new tissue. However, systemic conditions such as immunosuppression can impair this tissue regeneration process. This study analyzed tissue neoformation, mineralized tissue formation, and immunolabeling for dentin sialophosphoprotein (DSPP) and interleukin (IL)-1β in immunosuppressed rats after REP, with or without the use of injectable platelet-rich fibrin (iPRF). Twenty-four rats were divided into immunosuppressed and non-immunosuppressed groups (cyclophosphamide; 50 mg/kg). The animals were then allocated into four groups (n=6): REP, immunosuppressed REP (IM-REP), REP with iPRF (REP-iPRF), and immunosuppressed REP with iPRF (IM-REP-iPRF). After pulp necrosis induction, root canals were disinfected using 2.5% sodium hypochlorite and 17% EDTA, followed by intracanal medication (ICM). After 15 days, ICM was removed and intracanal bleeding was induced by overinstrumentation with a #10 K-file; in the REPiPRF and IM-REP-iPRF groups, iPRF was inserted into the root canal before bleeding induction. The molars were sealed, and after 21 days, the animals were
euthanized and specimens collected for histological (hematoxylin-eosin) and immunohistochemical analyses. Statistical tests were applied (p<0.05). The REP group showed connective tissue neoformation within the root canals extending to the middle and cervical thirds; the REP-iPRF group to the cervical third; and IM-REP and IM-REP-iPRF showed tissue neoformation only in the apical third, with a significant difference between REP and IM-REP (p<0.05). Specimens from REP and REP-iPRF groups showed neoformation of mineralized tissue in both length and thickness of the root canal; most IM-REP and IM-REP-iPRF specimens showed mineralized tissue formation in either length or thickness, or none, with a significant difference between REP-iPRF and IM-REP-iPRF groups (p<0.05). Most specimens from REP and REPiPRF showed moderate immunolabeling for DSPP; in IM-REP and IM-REP-iPRF, almost all specimens also showed moderate labeling, with no significant difference among the groups (p>0.05). All groups showed low immunolabeling for IL-1β (p>0.05). It can be concluded that immunosuppression negatively affected tissue neoformation within the root canals and the formation of mineralized tissue in immature rat molars after REP, but did not influence the presence of DSPP or IL-1β; furthermore, the use of iPRF did not affect the outcomes observed.
Assunto
Terapia de imunossupressão, Endodontia regenerativa, Polpa dentária
Palavras-chave
Imunossupressão, Endodontia regenerativa, Polpa dentária, Procedimento endodôntico regenerativo