Avaliação fenotípica e genotípica da resistência a antimicrobianos e diversidade clonal de amostras de Acinetobacter baumannii e Pseudomonas aeruginosa recuperadas de hemoculturas em hospitais de Belo Horizonte, Minas Gerais

Abstract

Amostras de Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii produtoras de enzimas capazes de hidrolisar antimicrobianos -lactâmicos têm sido reportadas como importante causa de infeções hospitalares assim como um grande problema terapêutico mundial. Buscou-se avaliar a resistência a antimicrobianos e a produção de enzimas Metalo-ß-Lactamases (MBL), Oxacilinases e Cefalosporinases, bem como a diversidade genética das amostras de P. aeruginosa e A. baumannii recuperadas de hemoculturas em cinco diferentes Hospitais de Belo Horizonte, Minas Gerais. Foram avaliadas 40 amostras de P. aeruginosa e 64 amostras de A. baumannii isoladas de hemoculturas, no período de dezembro de 2008 a junho de 2009. As amostras foram submetidas a testes de susceptibilidade a antimicrobianos pelos métodos de disco-difusão (DD) e determinação da concentração inibitória mínima (CIM). A produção de -lactamases foi avaliada pelos métodos fenotípicos de disco-aproximação (DA), Etest® MBL e teste de Hodge modificado (TMH). A reação de cadeia da polimerase (PCR) foi realizada para detecção dos seguintes genes: blaIMP-1, blaVIM-1, blaSPM-1, blaGIM-1 e blaSIM-1, blaOXA23, blaOXA24, blaOXA51, blaOXA58 e blaAmpC. A diversidade genética para definir similaridade entre amostras foi avaliada por RAPD e ERIC. Amostras de P. aeruginosa e A. baumannii mostraram taxas significativas de resistência a todos os antimicrobianos testados. As amostras de P. aeruginosa apresentaram níveis de resistência elevados aos antimicrobianos imipenem (45%), meropenem (45%), ceftazidima (47,5%), cefepime (45%), ciprofloxacina (55%), gentamicina (60%), enquanto que em amostras de A. baumannii mostraram altas taxas de resistência ao imipenem (93,8%), meropenem (89,0%), cefepime (96,9%), ceftazidima (98,4%) piperacilina+tazobactam (96,9%), ciprofloxacina (90,6%), aztreonam (87,5%). Doze (30%) amostras de P. aeruginosa e (37,5%) de A. baumannii apresentaram sinergismo com, pelo menos, uma das combinações de substrato-inibidor e foram consideradas produtoras de MBL pelo método de DA. Doze (30%) amostras de P.aeruginosa e (63,75%) de A. baumannii foram positivas para a produção de MBL pelo método do Etest. Apenas quatro amostras de P. aeruginosa (10%) foram positivas pelo teste de THM e, todas as amostras de A. baumannii foram negativas. Trinta e nove amostras de A. baumannii (60,9%) foram positivas para a pesquisa fenotípica de enzimas da classe D, pelo DA, enquanto que todas as amostras de P. aeruginosa foram negativas. Na pesquisa de cefalosporinase (AmpC), 79,6% amostras de A. baumannii e 37,5% de P. aeruginosa foram positivas de acordo com o DA. Trinta e cinco (87,5%) amostras de P. aeruginosa apresentaram produto de PCR compatível com fragmento dos genes blaSPM-1 e blaVIM-1, 87,5% ao blaSPM-1, e 15% ao blaVIM-1. A ocorrência simultânea dos genes, blaSPM-1/blaVIM-1, foi observada em 6 (15%) amostras de P. aeruginosa, não tendo sido identificados os genes blaIMP-1, blaSIM-1, blaGIM-1, blaOXA23, blaOXA24 e blaOXA58, blaAmpC em nenhuma destas amostras. Todas as amostras de A. baumannii (64/64) foram positivas a, pelo menos, um dos genes avaliados: 92,1% apresentaram o gene blaVIM-1; 79,6% o gene blaAmpC; 93,75% o gene blaOXA23 e 84,3% o gene blaOXA51. Os genes blaIMP-1, blaSIM-1, blaGIM-1, blaSPM-1, blaOXA24 e blaOXA58 não foram detectados. Pela análise por RAPD, foi possível agrupar 22 (53,6%) amostras de P. aeruginosa no perfil A; 31,7% no perfil B e 9,7% no perfil C. A análise por ERIC- PCR mostrou que a maioria das amostras de P. aeruginosa diferia entre si. Quanto ao A. baumannii, foi observado um predomínio de clones circulantes que diferem entre si. É importante notar que algumas amostras, de diferentes hospitais, apresentaram o mesmo perfil de bandas. Os resultados do presente estudo permitem sugerir que certas populações clonais estejam circulando entre os Hospitais em estudo, disseminadas por diferentes vias, como os profissionais da área de saúde e pacientes transferidos entre os hospitais.