Atividade enzimática em achatina fulica após infecção por angiostrongylus vasorum
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Enzymatic activity in achatina fulica after infection with angiostrongylus vasorum
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Resumo
O objetivo deste trabalho foi caracterizar atividade enzimática de N-acetil-β-Dglicosaminidase-like (NAG-like) e mieloperoxidase-like (MPO-like) em hemócitos e em
tecidos da região cephalopodal de Achatina fulica infectados por Angiostrongylus vasorum.
Foram utilizados 120 Achatina fulica: 40 moluscos para o Grupo ingestão de L1 – larvas de
primeiro estádio de A. vasorum; 40 moluscos para o Grupo inoculação de L1; 40 moluscos
para o Grupo controle (Não infectados). Os moluscos foram infectados individualmente com
1000 L1/24h obtidas a partir da técnica de Baermann de cães infectados conforme o protocolo
CEUA_UFMG 227/2022. Após a infecção, os moluscos foram transferidos para aquários,
alimentados com alface e ração contendo carbonato de cálcio, sendo observada sua
sobrevivência. No 1º, 8º e 30º dias após a infecção foi avaliada a ativação dos hemócitos, por
meio da coleta de hemolinfa por punção cardíaca e um grama de tecidos da região cephalopodal
e realização de testes enzimáticos. Para os testes da NAG-like e MPO-like, a preparação em 40
mg do tecido ocorreu em soluções com pH semelhantes, no entanto, a evidência da enzima
ocorre para o ensaio de N-acetil-β-D-glicosaminidase-like adicionou-se o substrato p-nitrofenilN-acetil-β- D-glicosamina a 37°c por 10 min e a estimativa da atividade foi a 405 nm. Para o
ensaio enzimático de mieloperoxidase-like, o substrato foi 3,3´, 5,5´- tetrametilbenzidina e a
leitura revelada a 450 nm. Na coloração de peroxidase 1 x 105
hemócitos foram monitorados
para a expressão de peroxidase resistente ao cianeto após fixar celulas em formol a 4% com
acetona por 30 segundos e corado por 10 min em fosfato tampão contendo 3,3 tetracloridrato
de diaminobenzidina (0,25%), peróxido de hidrogênio (H2O2) e cianeto de potássio (KCN) -
0,2% ao abrigo de luz. Após análises observou-se que A.fulica desafiada por A. vasorum
apresenta atividade enzimática semelhante a MPO e NAG.
Abstract
The objective of this work was to characterize the enzymatic activity of N-acetyl-β-Dglycosaminidase -ike (NAG-like) and myeloperoxidase-like (MPO-like) in hemocytes and in
tissues of the cephalopodal region of Achatina fulica infected by Angiostrongylus vasorum. 120
Achatina fulica were used: 40 mollusks for the L1 ingestion Group - first stage larvae of A.
vasorum; 40 mollusks for the L1 inoculation Group; 40 mollusks for the control Group (Not
infected). Mollusks were individually infected with 1000 L1/24h obtained from Baermann's
technique from infected dogs according to CEUA_UFMG protocol 227/2022. After infection
the mollusks were transferred to aquariums, fed with lettuce and feed containing calcium
carbonate and their survival was observed. On the 1st, 8th, and 30th day after infection,
hemocyte activation was evaluated by collecting hemolymph by cardiac puncture and one gram
of tissue from the cephalopodal region, and enzymatic tests were performed. For the NAG-like
and MPO-like tests, 40 mg of tissue was prepared in solutions with similar pH; however, for
the N-acetyl-β-D-glycosaminidase assay, the substrate p-nitrophenyl-N-acetyl-β-Dglycosamine was added at 37°c for 10 min and the activity was estimated at 405 nm. For the
myeloperoxidase-like enzyme assay the substrate was 3,3', 5,5'- tetramethylbenzidine and the
reading revealed at 450 nm. For peroxidase staining 1 x 105 hemocytes hemocytes were
monitored for cyanide-resistant peroxidase expression after fixing cells in 4% formalin with
acetone for 30 seconds and stained for 10 min in phosphate buffer containing diaminobenzidine
3,3 tetrachlorhydrate (0.25%), hydrogen peroxide (H2O2), potassium cyanide (KCN) - 0.2%
under shelter from light. After analysis it was observed that A. fulica challenged by A. vasorum
showed similar enzymatic activity to MPO, NAG
Assunto
Parasitologia, Acetiglucosaminidase, Peroxidase, Caramujos, Angiostrongylus
Palavras-chave
N-acetil-β-D-glicosaminidase-like (NAG-like), Mieloperoxidase-like (MPO-like), Coloração de peroxidase Achatina Fulica, Angiostrongylus vasorum