Estudo molecular da transição epitelial mesenquimal em carcinomas micropapilares invasivos da glândula mamária canina
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tese de doutorado
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Victor Piana de Andrade
Rafael Malagoli Rocha
Michele Angela Rodrigues
Rafael Malagoli Rocha
Michele Angela Rodrigues
Resumo
A Transição Epitelial mesenquimal (TEM) é um processo pelo qual as células neoplásicas epiteliais perdem a expressão de E-caderina, mediada pelos fatores de transcrição SNAIL, ZEB1, ZEB2 e TWIST, subsequentemente adquirindo um fenótipo mesenquimal comaumento do comportamento migratório. Alguns fatores de transcrição como ZEB1 e ZEB2, tem apresentado relação com o prognóstico e metastatização do câncer em humanos nas mais diferentes localizações. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão proteica de moléculas envolvidas com a TEM, como a E-caderina e seus repressores transcricionais, e a implicação prognóstica de ZEB1 e ZEB2 em carcinomas micropapilares invasivos (CMI), neoplasias agressivas e metastatizantes da glândula mamária canina. Por meio da técnica de imuno-histoquímica observou-se que os CMI apresentam diminuição da expressão de Ecaderina em áreas carcinomatosas in situ em relação às áreas invasoras demonstrandotendências para um aumento de sua expressão em metástases para linfonodo. Observou-se também uma redução gradativa da expressão de SNAIL de áreas carcinomatosas in situ para áreas invasoras, e focos metastáticos em linfonodos. Porém, na análise de ZEB1 observou-seaumento da imunoexpressão de áreas in situ e invasoras para metástases em linfonodos. A expressão de ZEB2 foi observada em 52%, 38% e 33% das áreas in situ, áreas invasoras e metástases para linfonodo, respectivamente. A expressão de TWIST foi observada em 41%, 28% e 0% das áreas in situ, áreas invasoras e metástases para linfonodo, respectivamente. Em áreas invasivas, a diminuição da expressão de E-caderina correlacionou significantementecom o aumento da expressão de SNAIL e TWIST. Adicionalmente, em componentes infiltrativos dos CMI, células neoplásicas E-caderina-negativas e SNAIL-positivas foram observadas por imunofluorescência. No estudo de comportamento prognóstico tumoral, a especifidade para os anticorpos anti-ZEB1 e -ZEB2 foi confirmada pela técnica de Western Blot. A positividade para ZEB2 citoplasmático apresentou relação direta com a menor sobrevida global de cães portadores de CMI; e foi mais frequentemente observada em áreas insitu quando comparadas às áreas invasoras desta neoplasia. A positividade para ZEB1 foi associada com a diminuição do grau histológico. Diante desses resultados, podemos concluirque a progressão metastática dos CMI caninos está relacionada à perda da expressão de Ecaderina, induzida pelo fator de transcrição SNAIL, e pela expressão de ZEB2. A proteína ZEB2 aparenta ser um fator prognóstico importante em cadelas portadoras de CMI mamários.
Abstract
The epithelial mesenchymal transition (EMT) is a process whereby neoplastic epithelial cells lost E-cadherin expression, mediated by the transcription factors SNAIL, ZEB1, ZEB2 and TWIST, afterwards acquiring a mesenchymal phenotype and increasing its migratory behavior. Some transcription factors, such as ZEB1 and ZEB2, have showed relationship with the prognosis and metastatisation process in different locations of the human cancer. Hence, the aim of this study was to evaluate protein expression of molecules related to EMT, such as E-cadherin and its transcriptional repressors, and the prognostic value of ZEB1 and ZEB2 ininvasive micropapillary carcinomas (IMPC), which are aggressive and metastasising neoplasms of the canine mammary gland. Through immunohistochemistry we have observed that E-cadherin expression decrease from carcinoma in situ to invasive progression and waslikely to increase in lymph node metastasis of IMPCs. SNAIL expression decreased gradually from carcinoma in situ to invasive areas and to metastatic focus in lymph nodes. However, in ZEB1 analysis we have observed increase of immunoexpression from in situ and invasiveareas to lymph node metastasis. ZEB2 expression was observed in 52%, 38% and 33% of carcinoma in situ areas, invasive areas and lymph node metastases, respectively. TWIST expression was observed in 41%, 28% and 0% of carcinoma in situ areas, invasive areas and lymph node metastases, respectively. In invasive areas, E-cadherin downregulation correlated significantly with SNAIL and TWIST upregulation. Additionally, in infiltrating components of IMPCs, E-cadherin-negative SNAIL-positive neoplastic epithelial cells were observed by immunofluorescence. In the study related to tumour prognostic behavior the specificity for anti-ZEB1 and ZEB2 antibodies was confirmed by western blot technique. The positivity for cytoplasmic ZEB2 showed direct relation to poor overall survival of dogs showing IMPC; and was more frequently observed in in situ areas than in invasive areas of this neoplasm. ZEB1 positivity was associated with a decrease of histological grade. Thus, we concluded that the metastatic progression of canine IMPC is related to the loss of E-cadherin expression, induced by the transcription factor SNAIL, and for ZEB2 expression. The ZEB2 protein appears to be an important prognostic factor in bitches with mammary IMPCs.
Assunto
Neoplasias mamárias animais, Transição epitelial-mesenquimal, Glândulas mamárias animais, Carcinoma papilar, Imuno-histoquímica/veterinária, Invasividade neoplásica, Cães Doenças
Palavras-chave
Carcinoma mamário, Imuno-histoquímica, Fatores de transcrição, Imunofluorescência, Cão, Transição epitelio-mesenquimal