Avaliação da ocorrência de periodontopatógenos em sítios periodontais de pacientes com e sem doença periodontal por cultura microbiológica e por reação de polimerização em cadeia
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Jacques Robert Nicoli
Carlos Roberto Martins
Eduardo Muniz Barretto Tinoco
Fulgêncio Antônio dos Santos
Carlos Roberto Martins
Eduardo Muniz Barretto Tinoco
Fulgêncio Antônio dos Santos
Resumo
Bastonetes anaeróbios produtores de pigmento negro, Fusobacterium nucleatum, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Tannerella forsythensis e Treponema denticola são periodontopatógenos putativos indígenas da cavidade oral, cuja freqüência e proporção nos sítios periodontais saudáveis e com doença podem exibir diferenças regionais. O objetivo deste estudo foi avaliar, por cultura microbiológica e por PCR, a ocorrência destes microrganismos em sítios periodontais de 30 pacientes com periodontite crônica, 30 com periodontite agressiva e de 30 indivíduos com periodonto saudável. Os espécimes foram colhidos com cones de papel e transferidos para Ringer PRAS, sob fluxo de CO2. O material foi homogeneizado, introduzido em câmara anaeróbica e, após realização de diluições seriadas até 10-4, cultivado em meios seletivos e incubado a 37ºC por até 15 dias. A identificação bacteriana baseou-se em características morfocoloniais, morfotintoriais e bioquímico-fisiológicas. O restante do espécime clínico foi centrifugado e o sedimento empregado para extração de DNA pelo método do fenol-clorofórmio. Primers específicos foram utilizados para amplificação de rDNA 16S por PCR. Os resultados obtidos por cultura microbiológica mostraram associação entre P. intermedia/nigrescens, F. nucleatum e F. varium e periodontite crônica e entre P. intermedia/nigrescens e A. actinomycetemcomitans e periodontite agressiva. Os resultados de PCR indicaram que P. intermedia, P. nigrescens, Fusobacterium spp., T. forsythensis e T. denticola estavam estatisticamente associados com as formas crônica e agressiva de periodontite, enquanto E. corrodens mostrou-se associada apenas à periodontite crônica. A PCR demonstrou ser mais sensível para a detecção da maioria dos microrganismos investigados. As associações, antagônicas ou sinergísticas, observadas entre as amostras bacterianas isoladas dos pacientes com periodontite agressiva diferem daquelas detectadas em pacientes com periodontite crônica, o que reforça a importância destas associações na expressão das doenças periodontais.
Abstract
Black-pigmented anaerobic rods, Fusobacterium nucleatum, Actinobacillus
actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens, Tannerella forsythensis and
Treponema denticola are putative periodontopathogens indigenous to the
oral cavity, which frequency and proportion in healthy and diseased
periodontal sites may exhibit regional differences. The purpose of this study
was to evaluate, by employing microbiological culture and PCR, the
presence of these microorganisms in periodontal sites of 30 patients with
chronic periodontitis, 30 patients with aggressive periodontitis and 30
subjects with healthy periodontium. The samples were collected with paper
points and transferred to Ringer PRAS solution, under CO2 flux. The material
was homogenized, introduced into an anaerobic chamber and, following
serial 10-fold dilutions up to 10-4, it was cultured onto selective media and
incubated at 37ºC for up to 15 days. Bacterial identification was based on
macroscopic, microscopic and biochemical-physiological characteristics.
Also, part of the clinical specimen was centrifuged and the sediment used
for DNA extraction by the phenol-chloroform method. Specific primers that
targeted the 16S rDNA were employed for PCR amplification. The results of
the microbiological culture have shown associations between P.
intermedia/nigrescens, F. nucleatum, F. varium and chronic periodontitis,
and between P. intermedia/nigrescens, A. actinomycetemcomitans and
aggressive periodontitis. The PCR results have indicated that P. intermedia,
P. nigrescens, Fusobacterium spp., T. forsythensis and T. denticola were
statistically associated to the chronic and the aggressive forms of
periodontitis, whereas E. corrodens was shown to be associated only to
chronic periodontitis. PCR has been shown to be more sensitive for the
detection of most of the investigated microorganisms. The antagonistic or
synergistic associations observed among the bacterial samples isolated from
patients with aggressive periodontitis, differ from those found in patients
with chronic periodontitis, which reinforces the importance of those
associations in periodontal disease expression.
Assunto
Microbiologia, Doenças Periodontais, Bactérias Anaeróbias, Placa Dentária
Palavras-chave
Placa subgengival, Bactérias anaeróbias, Doenças periodontais