Padronização da metodologia utilizada nas técnicas de imunoperoxidase em monocamada de células e imunohistoquímica para o diagnóstico da diarréia bovina a vírus
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Isabella Bias Fortes Ferraz
Maurilio Andrade Rocha
Romulo Cerqueira Leite
Rogeria Serakides
Maurilio Andrade Rocha
Romulo Cerqueira Leite
Rogeria Serakides
Resumo
Esse estudo teve como objetivo a padronização da metodologia de técnicas de diagnóstico para a Diarréia Bovina a Vírus (DBV). Especificamente, duas técnicas forma padronizadas: o ensaio de Imunoperoxidase em Monocamada de Células (IPM) semeadas em microplacas de 96 pocilhos para a identificação de amostras suspeitas processadas no Isolamento Viral (IV) e a técnica de Imunohistoquímica (IHQ) para o diagnóstico etiológico da DBV. O método de IPM identificou com sucesso o VDBV, apresentando melhores resultados com a utilização do calor como agente fixador, a soroalbumina bovina a 4% em PBS como bloqueador e revelação com o cromógeno AEC. Como anticorpos primários, tanto o anticorpo policlonal como o monoclonal puderam ser utilizados com êxito nesta reação. A IHQ detectou satisfatoriamente o vírus da DBV nas secções histológicas e os melhores resultados foram obtidos quando utilizou-se a combinação de anticorpos monoclonais como anticorpos primários e um kit comercial que utiliza o anticorpo secundário biotinilado e estreptavidina conjugada à peroxidase. A melhor revelação foi obtida com o uso do cromógeno DAB.
Abstract
Assunto
Diarréia em animais, Bovino Doenças, Imunohistoquímica, Vírus da diarréia em bovino
Palavras-chave
Métodos de diagnóstico, Imunoperoxidase, Isolamento viral, Imunohistoquímica, DBV, VDBV