RT-PCR quantitativa para detecção de DENV em larvas de Aedes SP
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Resumo
Dengue virus 1 a 4 (família Flaviviridae, gênero Flavivirus) (DENV-1, 2, 3, 4),
são responsáveis por estimados 50 milhões de casos anualmente. Infecções,
ocasionadas por qualquer um dos quatro sorotipos, podem causar uma doença
febril aguda e uma doença mais grave, muitas vezes fatal, caracterizada por
hemorragias e síndrome do choque. O vírus é transmitido principalmente por
mosquito Aedes aegypti e Aedes albopictus que, quando infectados pelo
DENV, transmitem o vírus ao hospedeiro no momento do repasto sanguíneo.
Os mosquitos podem adquirir o vírus ao picar um indivíduo infectado, do macho
para a fêmea (transmissão venérea) e através da progênie. A transmissão
vertical só ocorre quando o vírus multiplica-se no ovaríolo da fêmea e infecta os
ovos. Por não existir uma terapêutica específica, o método mais eficaz de
controle da doença é o combate direto ao vetor. Além disso, existem poucos
estudos que abordam a competência vetorial, que é a capacidade do mosquito
de infectar, manter a replicação e conseguir disseminar o vírus. Por isto que
este trabalho teve como objetivo avaliar a carga viral de DENV de pools de
larvas de Aedes sp coletados em Belo Horizonte- MG. A avaliação foi feita pela
amplificação de DNA da região 5´UTR do DENV e como controle do gene da
glutamino sintetase de Aedes sp, por qPCR. Para o desenvolvimento desta
técnica foi testada uma mistura composta por reagentes que permitiu detectar e
amplificar DENV em “pool” de larvas e até mesmo em uma única larva. Para a
determinação do número de cópias de DENV por larvas, testes
complementares deverão ainda ser feitos. Desta forma, os resultados obtidos
no presente estudo indicam que foi possível detectar, através de uma técnica
mais sensível, DENV em larvas de Aedes sp, e com perspectivas de uma
quantificação dos números de cópias. Os estudos empregando esta
metodologia serão importantes para avaliar a competência vetorial, indicando,
através dos números de larvas infectadas, o risco de transmissão da dengue
em uma determinada área e, dessa forma, auxiliar no controle e na prevenção
da dengue no Brasil.
Abstract
Dengue virus 1 to 4 (family Flaviviridae, genus Flavivirus) (DENV-1, 2, 3, 4), are
responsible for an estimated 50 million cases annually. Infections caused by
any of the four serotypes can cause an acute febrile illness and a more serious,
often fatal, characterized by hemorrhage and shock syndrome. The virus is
mainly transmitted by Aedes aegypti and Aedes albopictus, when DENVinfected, transmit the virus to the host at the time of blood meal. Mosquitoes
may acquire the virus by biting an infected person, male to female (venereal
transmission) and through the progeny. Vertical transmission occurs only when
the virus multiplies in the ovariole of the female and infected eggs. Because
there is no specific therapy, the most effective method of disease control is
direct combat the vector. In addition, there are few studies addressing vector
competence, which is the ability to infect mosquitoes, and to keep replicating
the virus spread. Why this study was to evaluate the viral load of DENV pools of
Aedes sp collected in Belo Horizonte-MG. The evaluation was done by
amplification of DNA from the 5'UTR region of DENV and the control of
glutamine synthetase gene from Aedes sp by qPCR. To develop this technique
was tested a mixture composed of reagents that detect and amplify DENV
allowed in pool of larvae and even a single larva. To determine the number of
copies of DENV by larvae, additional tests should still be made. Thus, the
results of this study indicate that it was possible to detect, through a more
sensitive technique, DENV on Aedes sp, and with prospects for a quantification
of the numbers of copies. Studies using this methodology will be important to
assess vector competence, stating, on the numbers of infected larvae, the risk
of dengue transmission in a given area and thus assist in the control and
prevention of dengue in Brazil.
Assunto
Microbiologia, Dengue, Aedes, Vírus da Dengue
Palavras-chave
DENV, Aedes, Belo Horizonte- MG, Competência vetorial