Produção e caracterização da proteína recombinante LipL32 de Leptospira spp
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Autor(es)
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Maria Rosa Quaresma Bomfim
Otto Domenici Mozzer
Jenner Karlisson Pimenta dos Reis
Anna Monteiro Correia Lima-Ribeiro
Otto Domenici Mozzer
Jenner Karlisson Pimenta dos Reis
Anna Monteiro Correia Lima-Ribeiro
Resumo
Este trabalho teve como objetivo caracterizar o perfil das proteínas da membrana externa (PMEs) da Leptospira interrogans sorovariedades Hardjobovis, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Wolffi; produzir e testar a proteína LipL32 frente ao soro de animais naturalmente infectados.Foram utilizadas técnicas de extração da membrana externa com Triton X114 e precipitação das proteínas com acetona, clonagem e subclonagem do gene LipL32, otimização do gene LipL32 para códons próprios da E. coli, construção do gene LipL32 de forma sintética,produção da proteína LipL32 e testes Western blot com a proteína recombinante LipL32. Na eletroforese com gel de poliacrilamida sob condições desnaturantes as bandas de massa molecular iguais a 22, 29, 32, 36, 41 e 48 KDa apresentaram-se como os principais componentes das PME das quatro sorovariedades testadas. Nos testes de Western blot as bandas com massas moleculares iguais a de 22, 29, 32, 41, 48, 52 e 75 KDa reagiram em todas as sorovariedades testadas. A expressão do gene sintético LipL32 foi realizada com sucesso, porém não foram obtidos níveis de expressão satisfatórios. A proteína LipL32recombinante foi reagente em todos os testes de Western blot realizados.
Abstract
This work aimed to study the profile of outer membrane proteins (OMPs) of Leptospira interrogans serovars Hardjobovis, Icterohaemorrhagiae, Pomona and Wolffi, express a sintetic gene LipL32 and test the LipL32 protein front of serum from naturally infected bovine. Techniques were used to extract the outer membrane with Triton X114 and precipitationwith acetone, cloning and subcloning of the gene LipL32, optimization of the LipL32 gene for expression in E. coli, construction of the LipL32 synthetic gene, expression and testing of the LipL32 protein in Western blot. In SDS-PAGE bands of molecular mass to 22, 29, 32, 36, 41 and 48 kDa proved to be the major components of outer membrane proteins of the four serovars tested. In the Western blot bands with molecular mass to 22, 29, 32, 41, 48, 52 and 75 kDa reacted in all the serovars tested. The LipL32 protein expression from synthetic gen was successful but did not achieve high levels of expression. Protein LipL32 was reactive in allWestern blot tests performed.
Assunto
Veterinária, Ciência Animal, Proteínas da membrana, Leptospirose em animais, Proteínas Eletroforese
Palavras-chave
Icterohaemorrhagiae, LipL32, Pomona e Wolffi, proteínas de membrana, Leptospira interrogans Hardjobovis