Comparação entre células-tronco isoladas do tecido adiposo da pálbebra humana e fibroblastos
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Dissertação de mestrado
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Primeiro orientador
Membros da banca
Adriana Bozzi de Melo
Samyra Maria dos Santos Nassif Lacerda
Samyra Maria dos Santos Nassif Lacerda
Resumo
As bolsas de gordura da pálpebra humana são uma fonte potencial de isolamento de células-tronco para uso na medicina regenerativa. Para futura aplicação clínica dessas células é fundamental estabelecer condições de cultivo livres de componentes animais assim como definir claramente a população de células-tronco diferenciando-a de outros tipos celulares, como os fibroblastos. As células-tronco mesenquimais (MSCs) compartilham semelhanças in vitro com os fibroblastos e não há marcadores específicos que permitam a clara distinção entre estes dois tipos celulares. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho é comparar fenotípica e funcionalmente as células-tronco isoladas das bolsas de gordura da pálpebra (OFSCs) e os fibroblastos residentes na pele da pálpebra cultivados em meio de cultura suplementado com plasma (PH) ou soro alogênico humano (SH) em substituição ao soro fetal bovino (SFB). Os resultados demonstraram que houve maior cinética de proliferação celular na presença do meio de cultura suplementado com SH indicando a viabilidade do uso desse suplemento para cultivo em larga escala de células para fins terapêuticos. As OFSCs cultivadas nesse meio apresentaram as características imunofenotípicas de MSCs, foram capazes de se diferenciar em osteoblastos, adipócitos e condrócitos e apresentaram altos níveis de atividade da fosfatase alcalina. Em contraste, os fibroblastos não exibiram propriedades de multipotência in vitro e apresentaram baixos níveis de expressão e atividade de fosfatase alcalina. Os resultados obtidos possibilitaram distinguir com sucesso as populações de OFSCs e fibroblastos viabilizando futuros estudos de avaliação dos fibroblastos da pálpebra como substituto dos fibroblastos do limbo em trabalhos visando a reconstrução da superfície ocular e permitirão também estudos de avaliação das pálpebras como um nicho de células-tronco para o globo ocular.
Abstract
Human orbital fat tissues are a potential source to isolate stem cells for the development of regenerative medicine therapies. For future clinical application of these cells is critical to establish animal components free culture conditions as well as clearly define the stem cells population differentiating it from other cell types, such as fibroblasts. The mesenchymal stem cells (MSCs) share in vitro similarities with fibroblasts and there are no specific markers allowing a clear distinction between these two cell types. Therefore, the aim of this study is to compare phenotypic and functionally orbital fat-derived stem cells (OFSCs) and fibroblasts resident in the eyelid skin grown in culture medium supplemented with allogeneic human serum (HS) or plasma (HP) replacing fetal bovine serum (FBS). The results showed that there was a greater cell proliferation kinetics in the presence of culture medium supplemented with HS indicating the feasibility of use of this supplement for clinical application to optimize the ex vivo expansion of cells before transplants. The OFSCs grown in this medium showed the immunophenotypic characteristics of MSCs and were able to differentiate into osteoblasts, adipocytes and chondrocytes. In contrast, the fibroblasts did not have multilineage differentiation potential and showed low levels of alkaline phosphatase expression and activity. The results enabled us to successfully distinguish OFSCs and fibroblasts populations and enabling future studies to evaluate the eyelid fibroblasts as a substitute for limbal fibroblasts works for ocular surface reconstruction and also allow evaluation studies of the eyelids as a stem cells niche to the eyeball.
Assunto
Biologia celular, Pálpebras, Fibroblasto, Células-tronco
Palavras-chave
Plasma humano, Fibroblastos, Soro humano, Pálpebra, Células-tronco