Avaliação do eixo ECA2/angiotensina (1-7)/receptor mas em células da granulosa-luteinizadas de mulheres inférteis e no processo de indução da ovulação para fertilização in vitro
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Universidade Federal de Minas Gerais
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Tipo
Tese de doutorado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Ana Cristina Simoes e Silva
Rui Alberto Ferriani
João Sabino Lahorgue da Cunha Filho
Aroldo Fernando Camargos
Rui Alberto Ferriani
João Sabino Lahorgue da Cunha Filho
Aroldo Fernando Camargos
Resumo
Objetivos: avaliar o comportamento dos níveis plasmáticos e no líquido folicular (LF) de angiotensina 1-7 [Ang-(1-7)] e angiotensina II (Ang II) na estimulação ovariana controlada em mulheres submetidas a ciclo de fertilização in vitro (FIV). Avaliar a expressão do receptor Mas (rMas), enzima conversora da angiotensina (ECA) e ECA2 na células da granulosa humana, correlacionando-as com as concentrações de Ang-(1-7) e Ang II no plasma e no LF. Correlacionar os componentes do sistema renina-angiotensina (SRA) com os parâmetros da FIV no grupo total de pacientes e nos grupos de resposta normal e baixa resposta. Pacientes e Métodos: estudo prospectivo, observacional, realizado no Laboratório de Reprodução Humana Professor Aroldo Fernando Camargos, do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), entre junho e dezembro de 2012. Foram incluídas 64 pacientes que assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido e foram submetidas à coleta de plasma antes e após a hiperestimulação ovariana controlada para FIV e coleta de LF para realização de radioimunoensaio (RIE) para Ang-(1-7) e Ang II e para dosagem de estradiol e progesterona. Realizou-se também coleta de células da granulosaluteinizadas para análise de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real para avaliar a expressão gênica do rMas e das enzimas ECA e ECA2. Resultados: houve aumento dos níveis plasmáticos de Ang-(1-7) e Ang II após a indução da ovulação com gonadotrofinas (p<0,0001). Não houve diferença estatística entre o nível de Ang-(1-7) no plasma pós-indução e no LF, entretanto, o nível de Ang II no LF foi três vezes mais alto que no plasma (p<0,0001). Observou-se correlação positiva entre Ang-(1-7) e Ang II, tanto no plasma pósindução (p<0,0001) quanto no LF (p=0,001). Os níveis plasmáticos de ambos os peptídeos, porém, não se correlacionaram com níveis do mesmo peptídeo no LF. As células da granulosa expressaram rMas, ECA e ECA2. Existiu correlação positiva entre o número de oócitos MII coletados e a expressão do rMas, mas apenas nas pacientes com mais de três oócitos coletados. Houve também forte correlação positiva entre a expressão da ECA e ECA2 (p<0,0001) e do rMAs com a ECA2 (p=0,006). Nas pacientes com baixa resposta, registraram-se níveis mais baixos de Ang-(1-7) no plasma pós-indução (p=0,047), além de correlação negativa do número de oócitos coletados com a Ang-(1-7) pós-indução e com a expressão do rMas (p=0,001). O grupo de resposta normal teve correlação negativa entre o número de oócitos MII coletados e a expressão da ECA2 (p=0,036). Não houve correlação entre o estadiol plasmático pós-indução e a Ang(1-7), o receptor Mas e as enzimas Eca e ECA2. Conclusão: durante o processo de indução da ovulação para FIV ocorre ativação do SRA sistêmico e ovariano. A Ang-(1-7) e Ang II parecem se comportar de forma semelhante durante a foliculogênese em humanos. A expressão de rMas, ECA2 e ECA nas céulas da granulosa e os altos níveis das angiotensinas no LF sugerem um efeito parácrino desses peptídeos nos folículos ovarianos humanos.
Abstract
Objective: To evaluate the RAS (renin-angiotensin system) behaviour during ovulation induction for IVF. To determine the expression of Mas receptor (rMas), ACE (angiotensin converting enzime) and ACE2 in human granulosa-lutein (GL) cells and its correlation with angiotensin 1-7 [ang-(1-7)] and angiotensin II (ang II) levels. To correlate RAS components with IFV parameters in the total group and between normal responder and low responders. Patients and Methods: This prospective, observational study performed from june to december 2012, in the Professor Aroldo Fernando Camargos Human Reproduction Laboratory from Hospital das Clínicas/UFMG included 64 patients, whose plasma before and after controlled ovarian hyperstimulation for IVF and follicular fluid (FF) were collected for radioimunoassay (RIA) for Ang-(1-7) and Ang-II and for estradiol and progesterone assay. Reverse-transcription polymerase chain reaction analysis for rMas and ECA2 in GL cells was performed. Results: There was a significant increase in Ang-(1-7) and Ang II levels in plasma, after ovulation induction, (p<0,0001). There was no diference between plasma and FF in Ang-(1-7) levels, however the Ang II FF level was threefold higher than plasma level (<0,0001). Ang-(1-7) showed a positive correlation between Ang II, in plasma after ovulation induction (p<0,0001) and in FF (p=0,001). There was no correlation between plasma and FF angiotensins levels. Messenger RNA expression for MAS, ACE and ACE2 was detected in GL cells. There was a positive correlation between MII oocytes and rMas expression, but only in women with more than three MII oocyte collected. A strong correlation between ECA and ECA2 (p<0,0001) and between rMas and ECA2 (p=0,006) was noted. The low responder women had lower ang(1-7) plasma level, after ovulation, and showed a negative correlation between MII oocytes and ang-(1-7) plasma levels and MII oocytes and rMas expression (p=0,0001). The normal responder group showed a positive correlation between MII oocytes and ECA2 expression (p=0,036). There is no correlation between estradiol and progesterone levels with Ang-(1-7), rMas, Eca and ECA2. Conclusions: The sistemic and ovarian RAS is activated during ovulation induction for IVF. Ang-(1-7) and Ang II levels seem to have similar effects in human foliculogenesis. rMas, ACE 2 and ACE mRNA expression in GL cells sugest a paracrine effect of SRA peptides in human ovary after gonadotropin stimulation.
Assunto
Líquido folicular, Angiotensina, Sistema renina-angiotensina, Indução da ovulação, Ovário, Angiotensinas, Fertilização in vitro
Palavras-chave
Angiotensina (1-7), Líquido Folicular, Sistema Renina Angiotensina, Ovário Indução da Ovulação