Avaliação da eficácia da proteína miriostelada-3 (smp-3) de leishmania amazonensis como candidata à vacina contra a leishmaniose visceral
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Editor
Universidade Federal de Minas Gerais
Descrição
Tipo
Dissertação de mestrado
Título alternativo
Primeiro orientador
Membros da banca
Fernanda Ludolf Ribeiro de Melo
Vinicio Tadeu da Silva Coelho
Vinicio Tadeu da Silva Coelho
Resumo
Em uma recente abordagem proteômica realizada em Leishmania amazonensis, a diminuição
da infectividade dos parasitos foi relacionada com proteínas que mostraram um aumento ou
diminuição no seu conteúdo de expressão durante o cultivo in vitro por longos períodos de
tempo, sendo as mesmas relacionadas à sobrevivência ou infectividade dos mesmos,
respectivamente. No presente estudo, uma abordagem computacional por meio de
bioinformática foi realizada com tais proteínas para identificação de possíveis fatores de
virulência do parasito entre tais moléculas. Três proteínas foram selecionadas, uma das quais
não apresentou homologia estrutural com a sequência de proteínas humanas. Este candidato,
denominado de proteína miriostelada-3 (SMP-3), foi clonado e sua versão recombinante
(rSMP-3) foi utilizada para estimular células mononucleares do sangue periférico (PBMCs)
de indivíduos saudáveis que vivem em área endêmica de leishmaniose e de pacientes com
leishmaniose visceral (LV). Os resultados mostraram elevada produção de interferon-γ (IFNγ) e baixos níveis de interleucina 10 (IL-10) nos sobrenadantes das culturas estimuladas.
Ensaios in vivo foram conduzidos em camundongos BALB/c, que foram imunizados com
rSMP-3/saponina e, posteriormente, desafiados com promastigotas de Leishmania infantum.
Nos resultados, a combinação rSMP-3/saponina induziu uma produção elevada de IFN-γ, IL12 e GM-CSF pelas células do baço dos camundongos imunizados. O perfil de resposta
imune foi associado à redução significativa da carga parasitária em diferentes órgãos dos
animais imunizados. Em conclusão, os resultados mostram que a proteína SMP-3 pode ser
considerada imunogênica em camundongos e humanos e eficaz na indução de proteção contra
a LV murina.
Abstract
In a proteomics approach performed using Leishmania amazonensis, parasite proteins
showed either an increase or a decrease in their expression content during extensive in vitro
cultivation and were related to the survival and infectivity of the parasites, respectively. In
the present study, a computational screening was performed to predict virulence factors
among these molecules. Three proteins were selected, one of which presented no structural
homology to human proteins. This candidate, namely small myristoylated protein-3 (SMP3), was cloned and its recombinant version (rSMP-3) was used to stimulate peripheral blood
mononuclear cells (PBMCs) from healthy subjects living in an endemic area of leishmaniasis
and from visceral leishmaniasis (VL) patients. Results showed high interferon-γ (IFN-γ)
production and low levels of interleukin 10 (IL-10) in the cell supernatants. An in vivo
experiment was performed on BALB/c mice, which were immunized with rSMP-3/saponin
and later challenged with Leishmania infantum promastigotes. The rSMP-3/saponin
combination induced high production of protein-specific IFN-γ, IL-12, and GM-CSF by the
spleen cells of the immunized mice. This pattern was associated with protection, which was
characterized by a significant reduction in the parasite load in distinct organs of the
immunized animals. Altogether, these results revealed that this new virulence factor is
immunogenic in both mice and humans and have proven its protective efficacy against
murine VL.
Assunto
Leishmania infantum, Leishmaniose, Proteínas Recombinantes, Vacinas, Biologia Computacional
Palavras-chave
Leishmania infantum, Proteínas recombinantes, Vacinas, Bioinformática