Avaliação in vitro da qualidade do sêmen equino criopreservado após a adição de vesículas extracelulares.
| dc.creator | Giovanna Sinigalia Leme Nogueira | |
| dc.date.accessioned | 2026-03-02T19:12:51Z | |
| dc.date.issued | 2025-05-05 | |
| dc.description.abstract | Although equine semen cryopreservation enables the preservation and transport of genetic material, the freezing process causes damage to spermatozoa. Seminal plasma (SP) contains extracellular vesicles (EVs) in its composition, which are particles that carry molecules and act as mediators of intercellular communication. The objective of this study was to improve the quality of cryopreserved equine semen by adding heterologous SP-derived EVs from a stallion with high progressive motility. EVs were isolated from SP and preserved in two different vehicles: Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (D-PBS) and BotuCrio®, an equine semen freezing extender. To test the effect of EVs on sperm quality from six stallions, semen was cryopreserved (100 × 10⁶ spermatozoa/mL) using the BotuCrio® extender and supplemented with 400 and 800 × 10⁶ EVs/mL. Seven treatments were performed: 1) Control, 2) D-PBS without EVs, 3) D-PBS + 400 × 10⁶ EVs/mL, 4) D-PBS + 800 × 10⁶ EVs/mL, 5) BotuCrio® without EVs, 6) BotuCrio® + 400 × 10⁶ EVs/mL, and 7) BotuCrio® + 800 × 10⁶ EVs/mL. Semen samples were thawed and analyzed for motility and kinematic parameters using a computer-assisted sperm analysis (CASA) system; morphology by phase-contrast microscopy; plasma membrane functionality using the hypoosmotic swelling test (HOST); plasma membrane integrity, acrosome reaction rate, and mitochondrial membrane potential by flow cytometry. Data were analyzed using analysis of variance (ANOVA) and assumption tests (Shapiro–Wilk for normality and Bartlett’s test for homoscedasticity). Means were compared using Tukey’s test. When assumptions were not met, the Skillings–Mack test was applied, followed by Durbin’s test for group comparisons. A probability of P < 0.05 was considered statistically significant. In the present study, the addition of PBS without EVs resulted in a significant reduction in the kinematic parameter beat cross frequency (BCF) (8.7 ± 0.3 Hz) compared with the control (9.5 ± 0.5 Hz). Other sperm motility and kinematic variables, as well as the remaining evaluated parameters, were not affected by the treatments. In conclusion, the tested concentrations of SP-derived EVs did not influence post-thaw sperm quality in equine sperm. | |
| dc.description.sponsorship | CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/1843/1834 | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de Minas Gerais | |
| dc.rights | Acesso aberto | |
| dc.subject | Equino | |
| dc.subject | Garanhão | |
| dc.subject | Reprodução animal | |
| dc.subject.other | reprodução; criopreservação; espermatozoide; garanhão; congelamento | |
| dc.title | Avaliação in vitro da qualidade do sêmen equino criopreservado após a adição de vesículas extracelulares. | |
| dc.title.alternative | In vitro evaluation of cryopreserved equine semen quality after the addition of extracellular vesicles. | |
| dc.type | Dissertação de mestrado | |
| local.contributor.advisor1 | Monique de Albuquerque Lagares | |
| local.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4137011194095124 | |
| local.contributor.referee1 | Juliano Coelho da Silveira | |
| local.contributor.referee1 | Priscila Fantini | |
| local.creator.Lattes | http://lattes.cnpq.br/4011313020580983 | |
| local.description.resumo | Embora a criopreservação do sêmen equino possibilite a preservação e o transporte do material genético, o processo de congelamento provoca danos aos espermatozoides. O plasma seminal (PS) possui em sua composição vesículas extracelulares (EVs), partículas carreadoras de moléculas, que atuam como mediadores da comunicação intercelular. O objetivo deste estudo foi melhorar a qualidade do sêmen criopreservado equino com a adição de EVs do PS heterólogo de um garanhão com motilidade progressiva alta. As EVs foram isoladas do PS e preservadas em dois diferentes veículos Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (D-PBS) e BotuCrio® diluidor de congelamento de sêmen equino. Para testar o efeito das EVs sobre a qualidade espermática do sêmen de seis garanhões, este foi congelado (100 × 10⁶ espermatozoides/ml) com diluidor de congelamento de sêmen equino BotuCrio® e suplementado com 400 e 800 × 10⁶/ml de EVs. Foram realizados sete tratamentos: 1) Controle, 2) D-PBS sem EVs, 3) D-PBS + 400 × 10⁶/ml EVs, 4) D-PBS + 800 × 10⁶/ml EVs, 5) BotuCrio® sem EVs, 6) BotuCrio® + 400 × 10⁶/ml EVs, e 7) BotuCrio® + 800 × 10⁶/ml EVs. As amostras de sêmen foram descongeladas e analisadas quanto aos parâmetros de motilidade e cinemática com o sistema de análise espermática computadorizado, morfologia com microscopia de contraste de fase, funcionalidade de membrana plasmática com o teste hiposmótico (HOST), integridade de membrana plasmática, taxa de reação acrossômica e potencial de membrana mitocondrial espermáticos com citometria de fluxo. Os dados foram analisados com análise de variância (ANOVA) e testes de pressupostos (Shapiro-Wilk para normalidade e Bartlett para homocedasticidade). As médias foram comparadas utilizando o teste de Tukey. Nos casos em que os pressupostos não foram atendidos, aplicou-se o teste de Skillings-Mack, seguido pelo teste de Durbin para comparação entre os grupos. A probabilidade de P<0,05 foi considerada significativa. No presente trabalho foi observado que a adição de PBS sem as EVs resultou em uma redução significativa do parâmetro de cinemática frequência do batimento cruzado de cabeça (BCF) (8,7 ± 0,3 Hz) quando comparado ao controle (9,5 ± 0,5 Hz). As outras variáveis de motilidade e cinemática espermática e os outros parâmetros avaliados não foram afetados pelos tratamentos. Em conclusão, as concentrações testadas de EVs derivadas do plasma seminal não influenciaram a qualidade do sêmen equino após o descongelamento. | |
| local.identifier.orcid | https://orcid.org/0009-0007-9276-1630 | |
| local.publisher.country | Brasil | |
| local.publisher.initials | UFMG | |
| local.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal | |
| local.subject.cnpq | CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA |