Both knock-down and overexpression of Rap2a small GTPase in macrophages result in impairment of NF-κB activity and inflammatory gene expression

Abstract

Pequenas Ras GTPases são moléculas-chave que regulam uma variedade de respostas celulares em diferentes tipos de células. Rap1 desempenha funções importantes na regulação da biologia dos macrófagos durante a inflamação desencadeada por receptores do tipo toll (TLRs). No entanto, apesar de compartilhar um grau relativamente alto de semelhança com Rap1, nenhum estudo sobre Rap2 em macrófagos e imunidade inata foi relatado ainda. Neste trabalho, mostramos que, de qualquer forma, alterações nos níveis de Rap2a dificultam a resposta adequada dos macrófagos à estimulação de TLR. Rap2a é ativado por LPS em macrófagos e, embora o fator de troca de guanina Ras induzível por TLR putativo RasGEF1b tenha sido suficiente para induzir, não foi totalmente necessário para a ativação de Rap2a. O silenciamento de Rap2a prejudicou a produção induzida por LPS de citocina IL-6 e quimiocina KC/Cxcl1, e também a atividade de NF-κB medida por estudos do gene repórter. Surpreendentemente, a superexpressão de Rap2a também levou à inibição marcada da ativação de NF-κB induzida por LPS, Pam3CSK4 e moléculas de sinalização TLR a jusante. Também descobrimos que Rap2a pode inibir a fosforilação induzida por LPS da subunidade NF-κB p65 na serina 536. Coletivamente, nossos dados sugerem que os níveis de expressão de Rap2a em macrófagos podem ser fortemente regulados para evitar resposta imune desequilibrada. Nossos resultados implicam Rap2a em respostas mediadas por TLR, contribuindo para o status de atividade de NF-κB equilibrado em macrófagos.