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Type:	Tese
Title:	MAPEAMENTO DE EPITOPOS LINEARES E DESENVOLVIMENTO DE UM MÉTODO DE DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DOS VENENOS DE Bothrops spp. E Crotalus durissus terrificus
Authors:	Patricia Donado Vaz de Melo
First Advisor:	Carlos Delfín Chavez Olortegui
First Co-advisor:	Leonides Rezsende Júnior
Abstract:	No Brasil, os acidentes ofídicos são causados principalmente por serpentes do gênero Bothrops e espécie Crotalus durissus terrificus (C.d. terrificus), respectivamente 86% e 10%, dos aproximadamente 25000 casos em 2019. O ofidismo apresenta diversas condições que precisam ser superadas. A primeira é a dificuldade em se obter um correto diagnóstico clínico, devido a sobreposição de sintomas, aliada ao baixo acesso aos serviços de saúde. Além disso, a indisponibilidade no mercado brasileiro de um produto de diagnóstico in vitro, por biodetecção, dos venenos de C.d. terrificus e do gênero Bothrops. Os antivenenos são o único tratamento específico e induzem reações de hipersensibilidade, pois sua produção utiliza venenos brutos como imunógenos, e a maioria dos antivenenos possui uma grande porção de imunoglobulinas que não são direcionadas contra os componentes tóxicos do veneno. Ademais, os soros antiofídicos disponíveis, às vezes, não protegem satisfatoriamente os pacientes devido ao fato de, o antiveneno ser composto por uma mistura de anticorpos, que não reconhecem exclusivamente um componente tóxico específico, presente no veneno da serpente ofensiva. Então, desenvolver um método de diagnóstico in vitro e aprimorar os antígenos utilizados na produção de antivenenos podem ser ações que reduzem as lacunas citadas. Para tanto, por meio de precipitação de imunoglobulinas e processos de imunopurificação alcançou-se anticorpos imunopurificados, de reduzida reatividade cruzada, sem prejuizo no reconhecimento dos antígenos que lhes originaram. Estes foram utilizados tanto no mapeamento de epitopos lineares de proteínas relevantes no quadro de envenenamento, quanto para a biodetecção dos venenos. A partir do mapeamento por Spot Synthesis, quatro epitopos lineares, Crotam1 de crotamina, Ctx2, Ctx3, Ctx4 de crotoxina foram identificados. Devido à representatividade de crotoxina e crotamina no peso seco do veneno de C.d. terrificus, respectivamente 70-90% e 10-25%, os epitpos dessas proteínas foram utilizados como imunógenos para produzir anticorpos direcionados. Então, antipeptídeos foram produzidos em coelhos, a partir de ciclos de imunização com lipossomas incorporados com os peptídeos solúveis de 21 resíduos. Por meio de ensaios de neutralização foi possível demonstrar a habilidade dos antipeptídeos em reduzir a letalidade do veneno de C.d. terrificus. Os anticorpos anti-C.d. terrificus e anti-Bothrops também foram utilizados no desenvolvimento de um método de aglutinação para detecção de veneno. As micropartículas revestidas com anti-C.d. terrificus aglutinaram na presença de 62 ng/mL e não apresentaram prozona até 1000 ng/mL de veneno de C.d. terrificus. Já as microesferas sensibilizadas com anti-Bothrops foram reativas a concentração de veneno de B. jararaca entre 2,74 ng/mL e 1500 ng/mL.
language:	por
metadata.dc.publisher.country:	Brasil
Publisher:	Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials:	UFMG
metadata.dc.publisher.department:	ICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA
metadata.dc.publisher.program:	Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia
Rights:	Acesso Restrito
metadata.dc.rights.uri:	http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/pt/
URI:	http://hdl.handle.net/1843/50676
Issue Date:	24-Jun-2020
metadata.dc.description.embargo:	24-Jun-2022
Appears in Collections:	Teses de Doutorado

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