Differential expression of Acanthamoeba castellanii proteins during amoebic keratitis in rats

Abstract

A ceratite amebiana (CA) é uma infecção com risco de visão caracterizada por uma inflamação grave da córnea, causada pelo protozoário de vida livre do gênero Acanthamoeba. A identificação de proteínas amebianas envolvidas na patogênese da AK pode ajudar a elucidar os mecanismos moleculares da infecção e contribuir para indicar alvos diagnósticos e terapêuticos. Neste estudo, avaliamos as mudanças no perfil de expressão de proteínas de Acanthamoeba desencadeadas pelo processo invasivo, usando uma abordagem envolvendo eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (2DE PAGE), seguida de identificação por espectrometria de massas (ESI-IT-TOF LC-MSn). AK foi induzida por inoculação intraestromal em ratos Wistar, usando trofozoítos de um genótipo T4, cepa de A. castellanii derivada de caso humano sob cultura axênica prolongada. Culturas reisoladas das lesões após duas passagens sucessivas nos animais foram utilizadas como triplicata biológica para experimentos proteômicos. A análise do perfil proteico comparando culturas de longo prazo e reisoladas indicou 62 pontos significativos, dos quais 27 proteínas puderam ser identificadas no banco de dados de proteomas de Acanthamoeba. Cinco deles (Serpina, Carboxipeptidase A1, Proteína hipotética, Proteína contendo o domínio Calponina, aldo/ceto redutase) foram encontrados exclusivamente nos trofozoítos reisolados. Nossa análise também revelou que uma modulação coordenada de várias vias bioquímicas é desencadeada quando A. castellanii muda de um estilo de vida livre para um modo parasitário, incluindo metabolismo energético, atividade proteolítica, controle da expressão gênica, degradação de proteínas e metilação do DNA, que também pode estar envolvido no ganho de virulência em um modelo animal de AK.