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http://hdl.handle.net/1843/55402| Tipo: | Dissertação |
| Título: | Implementação do sequenciamento genético massivo em paralelo na Seção Técnica de Biologia e Bacteriologia Legal da Polícia Civil do Estado de Minas Gerais |
| Autor(es): | Giovanni Vitral Pinto |
| primer Tutor: | Eduardo Martin Tarazona Santos |
| primer Co-tutor: | Rennan Garcias Moreira |
| primer miembro del tribunal : | Evanguedes Kalapothakis |
| Segundo miembro del tribunal: | Rinaldo Wellerson Pereira |
| Resumen: | A análise de amostras biológicas em genética forense é baseada especialmente na obtenção de perfis genéticos pelo processo de PCR (reação em cadeia da polimerase) seguida de eletroforese capilar (EC). Devido às características e limitações deste processo, a Seção Técnica de Biologia e Bacteriologia Legal do Instituto de Criminalística da Polícia Civil do Estado de Minas Gerais (STBBL - PCMG), trabalha para implementar a tecnologia de sequenciamento massivo em paralelo (SMP), uma das tecnologias conhecidas como Next Generation Sequencing (NGS). Com o objetivo de implementar a metodologia de SMP para fins forenses em amostras de violência sexual na STBBL – PCMG, foram selecionadas 30 amostras referentes a casos concretos de violência sexual, um controle positivo (CP) e um controle negativo (CN), para serem sequenciadas usando o ForenSeqTM DNA Signature Prep Kit da Verogen®. Essas amostras foram submetidas à metodologia de PCR - EC e posteriormente sequenciadas pelo método de SMP. As métricas da qualidade da corrida de implementação do SMP foram analisadas e evidenciaram o correto funcionamento do equipamento MiSeqTM FGX da Illumina. Os dados gerados pelo sequenciamento foram analisados e os resultados obtidos puderam ser comparados com os resultados fornecidos pela metodologia PCR - EC. Para a detecção de locos autossômicos, a metodologia de SMP não gerou perfil genético em 9,4% das amostras, enquanto a PCR - EC não gerou perfil genético em 21,9% das amostras. Quando utilizada a metodologia de SMP, em 81,3% das amostras foram obtidos perfis genéticos completos, enquanto a metodologia de PCR - EC forneceu perfis genéticos completos em 50% das amostras. A análise dos locos Y STRs, a partir da metodologia de PCR - EC, gerou perfis de haplótipo completos e/ou incompletos em 58,8% das amostras, enquanto, a metodologia de SMP gerou perfis de haplótipo completos e/ou incompletos em 43,7%. Soma-se ao melhor resultado apresentado pelo SMP para os STRs autossômicos, um conjunto de informações, tais como, X STRs e SNPs de identidade, os quais, a metodologia de PCR - EC, atualmente padronizada na STBBL, não é capaz de fornecer. Portanto, considerando os resultados deste estudo, concluímos que a metodologia de SMP foi implementada com sucesso no STBBL - PCMG gerando como resultado um Procedimento Operacional Padrão (POP) o qual poderá ser executado pelos Peritos da Seção. A partir do conjunto de dados obtidos pelo SMP é possível agregar informações relevantes à análise forense, tais como, aumentar o poder de discriminação, auxiliar em casos de violência sexual, em casos de paternidade resultante de estupro e em análise de amostras contendo misturas de material genético. |
| Abstract: | The analysis of biological samples in forensic genetics is based especially on obtaining genetic profiles by the process of PCR (polymerase chain reaction) followed by capillary electrophoresis (EC). Due to the characteristics and limitations of this process, the Technical Section of Biology and Legal Bacteriology of the Criminalistics Institute of the Civil Police of the State of Minas Gerais (STBBL - PCMG), works to implement the massive parallel sequencing (SMP) technology, one of the technologies known as Next Generation Sequencing (NGS). In order to implement the SMP methodology for forensic purposes in samples of sexual violence at STBBL - PCMG, 30 samples referring to specific cases of sexual violence, one positive control (PC) plus one negative control (NC), to be sequenced using Verogen®'s ForenSeqTM DNA Signature Prep Kit. These samples were submitted to the PCR - EC methodology and subsequently sequenced by the SMP method. The quality metrics of the SMP implementation run were analyzed and evidenced the correct functioning of the Illumina MiSeqTM FGX equipment. The data generated by the sequencing were analyzed and the results obtained could be compared with the results provided by the PCR - EC methodology. For the detection of autosomal loci, the SMP methodology did not generate a genetic profile in 9.4% of the samples, while PCR - EC did not generate a genetic profile in 21.9% of the samples. When using the SMP methodology, in 81.3% of the samples complete genetic profiles were obtained, while the PCR - EC methodology provided complete genetic profiles in 50% of the samples. The analysis of Y STRs loci, using the PCR - EC methodology, generated complete and/or incomplete haplotype profiles in 58.8% of the samples, while the SMP methodology generated complete and/or incomplete haplotype profiles in 43.7%. In addition to the best result presented by the SMP for autosomal STRs, a set of information, such as X STRs and identity SNPs, which the PCR - EC methodology, currently standardized in STBBL, is not able to provide. Therefore, considering the results of this study, we conclude that the SMP methodology was successfully implemented in STBBL/PCMG generating as a result a Standard Operating Procedure (SOP) which can be executed by the Section Experts. From the data set obtained by the SMP, it is possible to add relevant information to forensic analysis, such as increasing the power of discrimination, assisting in cases of sexual violence, in cases of paternity resulting from rape and in the analysis of samples containing mixtures of material genetic. |
| Asunto: | Genética Genética forense Marcadores moleculares Eletroforese |
| Idioma: | por |
| País: | Brasil |
| Editor: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Sigla da Institución: | UFMG |
| Curso: | Programa de Pós-Graduação em Genética |
| Tipo de acceso: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/55402 |
| Fecha del documento: | 11-feb-2022 |
| Aparece en las colecciones: | Dissertações de Mestrado |
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| Dissertação final - correções repositório.pdf | IMPLEMENTAÇÃO DO SEQUENCIAMENTO GENÉTICO MASSIVO EM PARALELO NA SEÇÃO TÉCNICA DE BIOLOGIA E BACTERIOLOGIA LEGAL DA POLÍCIA CIVIL DO ESTADO DE MINAS GERAIS | 1.64 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |
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