Identification of New Antigens for the Diagnosis of Visceral Leishmaniasis - Application in Immunochromatography

Abstract

A leishmaniose visceral (LV), causada pelos parasitos Leishmania infantum e L. donovani, é a forma mais grave dentre os diferentes tipos de leishmaniose, podendo levar à morte caso não diagnosticada e tratada. No Brasil, a LV é uma doença zoonótica, sendo o cão seu principal reservatório. Dentre as medidas de controle da LV recomenda-se a identificação e eutanásia de cães infectados, o diagnóstico precoce e o tratamento dos casos humanos. Entretanto, os métodos atualmente utilizados para o diagnóstico da doença não são suficientemente sensíveis ou específicos. No Brasil, o número de novos casos de LV em humanos e animais tem aumentado nos últimos anos, possivelmente devido à falha na identificação correta dos cães positivos, principalmente, os assintomáticos. Portanto, para um efetivo controle da LV é necessário o desenvolvimento de testes sorológicos capazes de diagnosticar corretamente infecções precoces com alta especificidade e sensibilidade. Portanto, um novo teste rápido imunocromatográfico de fluxo lateral baseado na proteína rKDDR-plus foi avaliado para o diagnóstico da LVH e Lcan. Além disso, novos antígenos capazes de reconhecer cães assintomáticos, bem como os sintomáticos, identificados a partir do proteoma predito de L. infantum e das proteínas recombinantes KDDR-plus e Dyn-1, que podem ser aplicados em plataformas imunocromatográficas e de biossensor, foram identificados. Para isso, uma seleção racional de possíveis alvos para o diagnóstico da LVC, baseada em duas triagens de peptídeos em larga escala foram realizadas. A primeira é uma triagem é baseada em diferentes análises de bioinformática do proteoma completo de L. infantum e das proteínas rKDDR-plus e rDyn-1. A segunda triagem foi realizada através da síntese dos peptídeos selecionados em membranas de celulose, que foram analisadas por imunoensaios, utilizando pool de soros caninos de seis grupos: (1) Lcan assintomáticos; (2) Lcan sintomáticos; (3) não infectado; (4) T. cruzi; (5) babesiose; e (6) erliquiose. Após a seleção dos peptídeos reativos apenas com os grupos com LVC (1 e 2), os candidatos foram sintetizados de forma solúvel para a validação por testes de ELISA. O desempenho diagnóstico dos testes para cada peptídeo selecionado será avaliado, utilizando soros individuais dos seis grupos, e comparado com o antígeno rK39 e extrato bruto de L. infantum, amplamente utilizados em testes comerciais. Posteriormente, os peptídeos mais promissores serão avaliados em testes rápidos imunocromatográficos e em uma plataforma de biossensor para tentar tornar o controle dessa parasitose mais eficiente.