Rewriting the history: the novel expression pattern of the RGMa protein in the satellite cell

Abstract

As Moléculas de orientação repulsivas (RGM) são uma família de proteínas multifuncionais composta por RGMa, RGMb, HFE2 e RGMd. Estudos recentes demonstraram que a proteína RGMa está ligada ao desenvolvimento do tecido muscular esquelético, controlando o tamanho e o mecanismo de fusão dos mioblastos em miotúbulos multinucleados. A superexpressão de RGMa na célula provoca o aparecimento de células hipertróficas, e sua ausência provoca o aparecimento de células atróficas. O padrão esperado de expressão dessa molécula nas células musculares esqueléticas está na membrana plasmática, mas o encontramos no núcleo das células-tronco musculares – as células satélites. Neste trabalho, levantou-se a hipótese de que a presença da proteína RGMa no núcleo das células satélites é impulsionada pelo domínio intracelular do seu receptor canônico, a neogenina. Células satélites do extensor longo dos dedos C57 Black foram isoladas de camundongos adultos. Posteriormente, a expressão endógena da neogenina foi derrubada utilizando transfecção de siRNA. As expressões de RGMa e neogenina foram determinadas por microscopia de imunofluorescência. Os resultados principais confirmaram que a proteína RGMa estava localizada nos núcleos das células satélites, enquanto a neogenina poderia ser encontrada na região perinuclear. A microscopia confocal mostrou que os picos fluorescentes estão no meio da pilha z, concluindo que o RGMa é expresso nos núcleos das células satélites. Em seguida, o western blot revelou que o RGMa37 ancorado é possivelmente o isotipo presente nos núcleos das células e o N-RGMa está no citoplasma da célula satélite. Além disso, uma nova banda de 50kDa pode ser expressa juntamente com RGMa37. Ao usar o siRNA-Neo1, a expressão da neogenina foi silenciada e o RGMa não pôde mais ser encontrado nos núcleos das células, sugerindo que a neogenina é o transportador para a nova expressão do RGMa nos núcleos das células satélites. A presença de RGMa-Neogenina no núcleo das células musculares esqueléticas implicará em possíveis novas funções biológicas para esta via de sinalização, que até o momento não foi descrita.